[发明专利]一种异种骨移植材料的制备方法

说明书

技术领域

[0001] 本发明属于医学生物材料技术领域，具体涉及一种异种骨移植材料的制备方法。

背景技术

异种骨是采用动物源性如猪或牛等的骨组织，经过处理降低其免疫原性，用作骨移植材料，在临床上植入患者骨缺损处，起到填充、支撑的作用，并最终改建成宿主的自身骨组织，从而达到治疗的目的。

公告号为CN1456363，名称为异种骨胶原基质制备的新方法的专利，公开了一种异种骨胶原基质制备的新方法，但该专利对异种骨胶原的制备方法未做详述，所提到的部分脱钙会引起骨材料的力学强度明显下降；公告号为CN1188015，名称为新型块形脱脂去抗原异种骨移植材料及其制备方法的专利，采用脱脂、去抗原及部分脱钙的方法处理异种骨，骨矿成分与胶原蛋白的含量比例约为１:１，导致所制备材料力学强度明显下降；公告号为CN1296804，名称为强力抗感染型重组合异种骨的制备方法的专利，采用抗菌剂与重组合异种骨复合，使材料既有骨诱导活性又有抗感染性，但重组合异种骨要复合骨形态发生蛋白，剂量难于控制，加之受体个体差异的不确定性，如果剂量过大容易诱发骨肿瘤。由此可见现有的异种骨制备方法制备过程大多比较繁琐，或引入的化学试剂过多容易引起残留，或清洗效果难以保证，关键性的，未有针对性地对异种骨材料进行病毒灭活处理，以确保移植的安全性，都难以提供一种既保留生物活性与力学强度、又安全有效的异种骨移植材料。

发明内容

本发明主要针对目前异种骨移植材料存在的制备过程繁琐、清洗效果难以保证、化学物质引入过多易发生残留、没有进行病毒灭活等不足，而提供一种方法比较简单、清洗效果好、既降低了异种骨材料的免疫原性，又能保留骨诱导活性与力学强度的异种骨移植材料的制备方法。

本发明为实现上述目的而采取的技术方案为：

一种异种骨移植材料的制备方法，包括以下步骤：

1）取材：健康合格的动物，生长6个月以上，取其髂骨与四肢长骨，即异种骨；

2）深低温冷冻：将所取异种骨储存于深低温冰箱中保存；

3）成型：将深低温冷冻后的异种骨表面软组织剔除干净，锯裁成型；

4）清洗：将成型的异种骨浸于水中，超声条件下清洗2～5次，以骨组织不显血色为准；

5）除病毒：将步骤（4）所得异种骨，采用次氯酸钠溶液浸泡，以灭活可能潜在的病毒，每小时换液一次，然后用水在超声条件下清洗2～5次；

6）脱脂：将步骤（5）所得异种骨，用碳酸钠溶液进行脱脂清洗，每小时换液一次；

7）酶处理：将脱脂后的异种骨，采用胰酶溶液处理；

8）清洗：经胰酶溶液处理的异种骨，在超声条件下用水清洗干净；

9）冷冻干燥：清洗干净的异种骨，冷冻干燥至含水的质量分数为2-10%；

10）灭菌：冻干的异种骨，用不少于两层袋包装后，进行钴-60 γ射线辐照灭菌。

其中所述的深低温保存条件为-70度以下保存不少于1个月。

所述的次氯酸钠溶液的质量分数为0.05%～5%，处理时间为0.5～16小时。 

所述的碳酸钠溶液的质量分数为0.05%～5%，水温35～70度，处理时间为0.5～20小时。 

所述的胰酶溶液的浓度为0.1～10g/L，水温30～60度，处理时间为0.5～20小时。

所述的冷冻干燥至含水量为5%。

所述的钴-60 γ射线辐照灭菌剂量为15～30kGy。

本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

（1）本发明采用深低温冷冻的方法保存异种骨，降低了其免疫原性；

（2）本发明采用超声条件下清洗的办法，提高了清洗的效率与效果；

（3）本发明采用次氯酸钠溶液对异种骨组织进行病毒灭活，杜绝病毒传播的可能性；

（4）本发明采用碳酸钠溶液进行脱脂，脱脂效果好，并且不引入其它可能对人健康有影响的化学试剂； 

（5）本发明进一步采用酶处理异种骨，对其胶原结构进行切割，进一步降低其免疫原性。

附图说明

图1是实施例1制备的猪源性异种骨数码照片；

图2是实施例1制备的猪源性异种骨放大25倍的扫描电镜图；

图3是实施例1制备的猪源性异种骨放大2000倍的扫描电镜图；

图4是新鲜猪源性异种骨放大了200倍的光学显微镜图；

图5是实施例1制备的猪源性异种骨放大200倍的光学显微镜图，