[发明专利]结合叶绿素荧光技术和原生质体系统研究光合作用的方法及其应用

权利要求书

1.一种研究光合作用相关功能基因的方法，包括如下步骤：

1)制备含有叶绿体的原生质体，并将待测基因和/或反义核酸序列转入原生质体并确认待测基因可瞬时表达和/或反义核酸序列已使基因表达瞬时沉默；

2)将转入有待测基因和/或反义核酸序列的原生质体和对照原生质体进行暗适应处理；

3)将暗适应处理的原生质体进行光照处理，获取其荧光图像和/或荧光参数，或基于荧光图像和/或荧光参数绘制叶绿素荧光诱导动力学曲线和/或光诱导曲线；

4)对比不同处理组的荧光图像、荧光参数、叶绿素荧光诱导动力学曲线、光诱导曲线中的至少一种，判断待测基因和/或反义核酸序列对光合作用的影响，确定其是否为光合作用相关基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：转入原生质体的待测基因和/或反义核酸序列至少为一种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：暗适应处理的时间为8～12 min。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：测定叶绿素荧光诱导动力学曲线和快速光响应曲线的程序为：

1)打开不足以使原生质体进行光合作用的微弱测量光，测得最小荧光F₀；

2)随后施加一个饱和脉冲，关闭所有的电子门，暂时抑制植物的光合作用，得到最大荧光Fm；

3)打开光化光，使原生质体光合作用，施加饱和脉冲后，得到的叶绿素荧光为光化光下最大荧光Fm’；

4)待饱和脉冲处理后，叶绿素荧光值达到稳态之后，关闭光化光，同时打开远红光，使电子门回到开放态，F 回到最小荧光F₀ 附近，此时得到的荧光为F₀’。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：原生质体为拟南芥叶肉细胞原生质体。