[发明专利]一种海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺

权利要求书

1.一种海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，包括宿主菌培养和噬菌蛭弧菌培养，其中：

所述宿主菌培养，包括以下步骤：（1）一级摇瓶种子培养——将经活化处理后的宿主菌接种于盛装有培养基的一级摇瓶中，在温度33±1℃、转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得一级摇瓶宿主菌种子；（2）二级摇瓶种子培养——在盛装有培养基的二级摇瓶中接入步骤（1）培养好的一级摇瓶宿主菌种子，在温度33±1℃、转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得二级摇瓶种子；（3）种子罐培养——将步骤（2）培养好的二级摇瓶种子按照1%~3%的体积比接入盛装有培养基的种子罐中，在罐温37±1℃、罐压0.045~0.55 MPa、搅拌转速80~120转/分的条件下培养18~24h即制得宿主菌种子液；（4）发酵罐培养——在盛装有培养基的发酵罐中接入步骤（3）培养好的宿主菌种子液，在罐温35±1℃、罐压0.05 MPa、搅拌转速80~100转/分的条件下培养16~24h即可；

宿主菌培养过程中，在向一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐以及发酵罐的培养基接种前，盛装有相应培养基的一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐以及发酵罐均经过灭菌处理；

所述噬菌蛭弧菌培养，包括以下步骤：1）将经活化处理后的噬菌蛭弧菌接种于培养好一级摇瓶宿主菌种子的一级摇瓶中，在温度33±1℃、摇瓶转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得一级摇瓶噬菌蛭弧菌；2）在培养好二级摇瓶种子的二级摇瓶中，接入步骤1）培养好的一级摇瓶噬菌蛭弧菌，在温度33±1℃、摇瓶转速180~220转/分的条件下培养18~24h，即制得二级摇瓶噬菌蛭弧菌；3）在培养好宿主菌种子液的种子罐中，按1%~5%的体积比接入步骤2）培养好的二级摇瓶噬菌蛭弧菌，在温度33±1℃、罐压0.05 MPa、搅拌转速80~100转/分的条件下培养16~24h，即制得噬菌蛭弧菌种子液；4）在已培养好宿主菌的发酵罐中，按3%~5%的体积比接入步骤3）培养好的噬菌蛭弧菌种子液，在罐温33±1℃、罐压0.05 MPa、搅拌转速80~100转/分的条件下，培养72~96h，即制得蛭弧菌菌液；

一级摇瓶的培养基配方为：氯化钠0.4~0.6 g/l；酵母粉0.2~0.4 g/l；蛋白胨或胰蛋白胨0.4~0.6g/l；该培养基的pH为6.5~6.8；

二级摇瓶的培养基配方为：氯化钠0.4~0.6 g/l；酵母粉0.2~0.4 g/l；蛋白胨0.4~0.6g/l；该培养基的pH为6.5~6.8；

种子罐的培养基配方为：氯化钠 0.18~0.22 g/l；酵母粉0.08~0.12 g/l；蛋白胨或胰蛋白胨0.18~0.22 g/l；消泡剂 0.009~0.011 g/l；该培养基的pH为7.0~7.2；

发酵罐的培养基配方为：氯化钠0.18~0.22 g/l；酵母粉0.08~0.12 g/l；蛋白胨或胰蛋白胨0.18~0.22 g/l；消泡剂0.018~0.022 g/l；该培养基的pH为6.5~6.8。

2.根据权利要求1所述海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌、非致病性的嗜水气单胞菌或假单胞菌。

3.根据权利要求1所述海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐以及发酵罐的培养基所采用的pH调节试剂均为NaOH溶液。

4.根据权利要求1所述海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，种子罐以及发酵罐培养基配方中所采用的消泡剂均为水溶性硅油。

5.根据权利要求1所述海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，一级摇瓶、二级摇瓶、种子罐以及发酵罐的培养基灭菌条件为在0.1MPa、121℃的条件下历时20min。

6.根据权利要求1所述海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，接入一级摇瓶中的宿主菌以及噬菌蛭弧菌均为菌悬液；所述宿主菌菌悬液的制备方法为：先采用常规方法制取斜面宿主菌，然后取斜面宿主菌1支，加入8~12ml无菌水，即可制成宿主菌菌悬液；所述噬菌蛭弧菌菌悬液的制备方法为：先采用常规方法制取斜面噬菌蛭弧菌，取斜面噬菌蛭弧菌一支，加入8~12ml无菌水，即可制成噬菌蛭弧菌菌悬液。

7.根据权利要求6所述海水养殖专用蛭弧菌的发酵生产工艺，其特征在于，一级摇瓶的培养基装量为80~110ml/250ml培养瓶，而一级摇瓶中宿主菌菌悬液接种量为0.4~0.6ml/瓶、噬菌蛭弧菌菌悬液接种量为1-3ml/瓶；二级摇瓶的培养基装量为180~220ml/500ml培养瓶，而二级摇瓶中一级摇瓶宿主菌种子、一级摇瓶噬菌蛭弧菌的接种量均为1~3ml/瓶。