[发明专利]N末端B型脑钠肽前体化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的涉及N末端B型脑钠肽（NT-proBNP）化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

脑钠肽（Brain Natriuretic Peptide，BNP）又称B型利钠肽（B-type Natriuretic Peptide），是继心钠肽（ANP）后利钠肽系统的又一成员，由于它首先是由日本学者Sudoh等于1988年从猪脑分离出来因而得名，实际上它主要来源于心室。心肌细胞首先合成108氨基酸的BNP原，又称BNP前体（proBNP），在蛋白酶的作用下proBNP分解为N末端B型脑钠肽前体（NT-proBNP）和生物活性激素BNP，两种多肽都释放进入血循环。两者来源相同并且等摩尔分泌。今年来一些研究表明，N末端(NT-proBNP)不仅半衰期长、稳定性好，且与BNP相性良好，心力衰竭时其变化幅度达BNP的6～20倍，较BNP更敏感，所以其早期诊断的价值更高，是诊断心力衰竭和评价心脏功能的最佳心肌标志物。

心力衰竭是老年人住院或死亡的最常见原因之一。随着人口老龄化及心肌梗死生存率的上升，心力衰竭作为心血管疾病中唯一一个发病率和流行性仍在持续上升的疾病，其防治已成为近年来临床心脏病学研究的热点。

当心功能不全时，由于心脏容量负荷或压力负荷增加，心肌受到牵张或室壁压力增大，会使血中BNP和NT-proBNP的指标浓度增高，而这恰恰是诊断心衰较为敏感的指标，可以独立预测左心室舒张末期压力升高状况。因此，NT-proBNP可以作为一个更好的预示心衰状况的指标。此外，NT-proBNP有助于急性呼吸困难的鉴别诊断，可对心力衰竭病人的危险分层，可监测心力衰竭的治疗，NT-proBNP水平还可用于心力衰竭病人的预后评价等。

总之，随研究深入，血浆NT-proBNP浓度的测定很有可能作为评估心功能的一项重要补充，成为一项简便易行的常规检查。

目前临床上甲状腺球蛋白抗体定量检测常用方法有：放射性免疫分析（RIA）和酶联免疫分析（ELISA），但是RIA存在放射性污染、操作繁琐、试剂有效期短等缺点，而ELISA虽然可以避免上述缺点，但是其灵敏度较低。

化学发光免疫分析（CLIA）起步于80年代初，快速发展应用于90年代，为当今最为敏感的微量免疫测定法。其主要特点是高敏感性、可测定浓度范围宽、样本无需稀释即可检测、试剂有效期长、操作简单、检测自动化成度高、数据自动生成处理能力强、测定仪器兼容性好、无环境污染等，因而得到了迅速发展与应用，目前已广泛应用到基础和临床医学的各个领域，成为取代RIA的首选技术。但目前使用化学发光方法检测NT-proBNP还没有广泛应用在临床上。

发明内容

本发明要解决的问题是提供N末端B型脑钠肽（NT-proBNP）的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，检测范围窄，成本高的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：N末端B型脑钠肽前体化学发光免疫定量检测试剂盒，所述试剂盒包括：NT-proBNP抗体包被板、NT-proBNP抗体酶结合物、NT-proBNP校准品、20倍浓缩洗液、发光液A液和B液。

所述的N末端B型脑钠肽前体抗体包被板的固相载体为96孔或48孔的白色微孔板，白色微孔板的孔间平均变异不高于10%。

所述的抗体酶结合物所用的酶为辣根过氧化物酶，纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL，购自Sigma公司。

所述的NT-proBNP抗体来源于Fitzgerald公司，在外观上应澄清透明，无沉淀，纯度应≥90%，采用倍比稀释测定效价应不低于10⁵倍稀释，应确保NT-proBNP测定的灵敏度、特异性和稳定性。

所述的NT-proBNP质控品包括低值质控品（QcL）和高值质控品（QcH），其中低值质控品的浓度范围是83.90～125.84pg/mL，高值质控品的浓度范围是6678.58～10017.90pg/mL。

所述的NT-proBNP化学发光免疫定量检测试剂盒，所述的发光液A液包含0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚；B液包含0.675g/L过氧化脲。

所述的20倍浓缩洗液包括75.5g/L Tris，120g/L NaCl，5mL/L Tween-20，1g/L Proclin300。

上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

1）NT-proBNP抗体包被板的制备