[发明专利]一种特异性γ-谷氨酰基转移酶检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种特异性γ-谷氨酰基转移酶特异性检测方法及其应用。

背景技术

血清中的γ-谷氨酰基转移酶(GGT，EC2.3.2.2)是以同工酶或多种分子形式存在的，有些GGT能与脂蛋白结合在一起，如与低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)结合，但其形成原因及生理功能尚不清楚。现有技术中，关于血清GGT总活性测定是临床常规开展的酶学检测项目，其在急性病毒性肝炎、慢性肝炎、肝炎后肝硬化、肝内胆汁淤积、肝外胆道阻塞、原发性或转移性肝癌时，均有不同程度增高；但血清中GGT总活性测定特异性低，无法作为与之相关疾病的特异性检查，尤其是对于肝癌与其他肝病的鉴别诊断尚缺乏特异性的检测方法及其配套产品。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种特异性γ-谷氨酰基转移酶检测方法及其应用，是特异性针对与血清中低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白结合的γ-谷氨酰基转移酶活性，以实现用简便、快捷的方法来检测样品中肝癌及其其他严重肝病的鉴别诊断。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种特异性γ-谷氨酰基转移酶检测方法，具体为：通过检测以抗载脂蛋白B抗体(Apo B抗体)与低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)间形成的免疫沉淀结合物前后的血清中的γ-谷氨酰基转移酶的活性差值。

作为一种优选方案，所述的抗载脂蛋白B抗体与低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)间形成的免疫沉淀结合物后的血清中的γ-谷氨酰基转移酶的活性为形成免疫结合物后经离心的上清液中的γ-谷氨酰基转移酶的活性。

作为进一步优选方案，所述的检测γ-谷氨酰基转移酶的活性的方法为以L-γ-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺(3-carboxy-GGPNA)为底物且能在全自动生化分析仪上应用的连续监测法。

作为更进一步优选方案，上述检测方法包括如下步骤：

4)测定样品血清中的总γ-谷氨酰基转移酶的活性；

5)加入抗载脂蛋白B抗体液及沉淀剂，5～30分钟后，离心，取上清液，测定上清液中的γ-谷氨酰基转移酶的活性；

6)计算步骤1)与步骤2)中的γ-谷氨酰基转移酶的活性差值。

一种特异性γ-谷氨酰基转移酶检测方法的应用，是指以上述方法制备用于诊断或辅助诊断肝癌的诊断试剂或诊断试剂盒。

作为一种优选方案，上述的诊断试剂或诊断试剂盒，包括抗载脂蛋白B抗体液、缓冲液、沉淀剂。

作为进一步优选方案，所述的缓冲剂为pH7.0，30mmol/L MOPS缓冲液。

作为进一步优选方案，所述的沉淀剂为30％聚乙二醇6000。

与现有技术相比，本发明提供了一种简单有效的诊断或辅助诊断肝癌的诊断试剂或诊断试剂盒，实验结果表明，本发明提供的特异性检测血清LDL/VLDL-GGT活性方法可用于检测或辅助检测肝癌的诊断试剂或诊断试剂盒，平均诊断特异性可达70％以上，平均阳性预测值为90％。因此，其应用前景十分广阔。

附图说明

图1为本发明提供的特异性γ-谷氨酰基转移酶检测试剂盒的结构示意图。

具体实施方式

下面结合实施例及对比例对本发明作进一步详细、完整地说明。

实施例

1、制备特异性γ-谷氨酰基转移酶检测试剂盒(10人份)，具体如图1所示，其中包括三管试剂，分别为：

抗体液(1)：抗人Apo B抗体+缓冲液；

缓冲液(2)pH7.0，30mmol/L MOPS；

沉淀剂(3)：30％聚乙二醇6000。

A.试剂组成：

1)对照组(总活性组)：pH7.0，30mmol/L MOPS缓冲液850μL。

2)抗体组(待测定组)：含抗载脂蛋白B抗体850μL、30％聚乙二醇6000沉淀剂420μL。

B.操作步骤：

(1)抗体组：在离心试管内加入患者血清标本100μL，抗体液80μL，沉淀剂20μL，37℃放置20min，离心(5500g×5min)，取上清液在生化分析仪上测定GGT活性。

(2)对照组：在离心试管内加入患者血清标本100μL，缓冲液80μL，沉淀剂20μL，37℃放置20min，离心(5500g×5min)，取上清液在生化分析仪上测定GGT活性。

(3)结果计算：LDL/VLDL-GGT活性(U/L)＝(对照组管-抗体组管)×2。