[发明专利]一种从红豆杉中提取紫杉醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物提取技术领域，具体涉及一种从红豆杉中提取紫杉醇的方法。 

背景技术

紫杉醇（paclitaxel, 商品名 Taxol）是具有高效抗肿瘤活性的天然活性成分，是从红豆杉属植物中提取出来的一种二萜类化合物。紫杉醇具有复杂的化学结构（式Ⅰ），分子是由3个主环构成的二萜，分子中具有11个手性中心和多个取代基团。 

（Ⅰ） 

目前，我国紫杉醇原料药生产主要来源为天然红豆杉树皮或枝叶。但目前由于红豆杉植物资源的匮乏以及人工种植的红豆杉植物产业化规模尚不成熟，目前天然来源的紫杉醇尚不能满足临床应用。我国制药企业对于紫杉醇的需求对进口的依赖性较强，部分进口的红豆杉植物提取物为紫杉醇的粗品，其中紫杉醇含量为40～55%左右，但紫杉醇作为抗癌药品，临床使用时对其纯度要求高，所以现有的紫杉醇提取工艺和提取物不能满足临床应用需求。

紫杉醇分离纯化难度大主要体现在以下四个方面：1. 在植物中含量极低；2. 紫杉醇结构类似物相当多，已发现的紫杉烷类物质多达200多种；3. 紫杉醇在分离过程中受温度、有机溶剂、酸、碱等环境条件的影响易降解或异构生成其它紫杉烷类物质；4.工艺复杂，设备要求高，成本高。 

目前报道中使用的提取分离方法有：萃取法、超临界萃取、膜分离法、树脂柱层析法等。萃取法步骤多，产物损失大；超临界流体萃取收率高、省时间，但该方法对设备要求高，操作条件严格，且用于粗提阶段成本过高，至今还难以进行大规模的实践应用；膜分离法可以进一步浓缩由粗提工艺获得的浸膏，提高紫杉烷类物质的浓度，但是半透膜和反渗透装置价格昂贵，同时需要复杂的操作技术。采用树脂法提取分离紫杉醇具有其它工艺无法比拟的优点，如果能够针对紫杉醇的特定结构及物化性质研制出专门的新型的树脂，将会在此领域得到更为普遍的应用。正相色谱法是紫杉醇分离纯化过程中普遍采用的方法，在早期分离纯化的研究中占有主导地位，至今仍在广泛使用，正相色谱的突出优点是固定相价格低廉，而且流动相多为挥发性很强的有机溶剂，溶剂回收简单可循环利用。 

现有技术公开了一种采用正相色谱法从种植红豆杉叶枝中制备紫杉醇的方法，使用种植生长了2～4年的红豆杉的树叶、树枝，剪除直径小于0.5cm的树枝后粉碎，用75％～95％的乙醇浸泡24～48小时，过滤后去除废渣，滤液浓缩后用1∶1乙酸丁酯和水分散萃取，乙酸丁酯萃取液浓缩、干燥得到1％紫杉醇粗原料；利用1％紫杉醇粗原料，经常压正相硅胶柱层析，以乙酸乙酯和环己烷梯度淋洗，分段收集淋洗液，将紫杉醇含量在10％～30％之间的馏分浓缩后经反相C18高压液相色谱法分离，得到纯度为99.5％以上的紫杉醇。但是，该技术采用C18为固定相高压液相色谱制备，而C18价格昂贵，高压液相色谱柱对设备要求又非常高，目前很难应用于工业化生产，只适用于实验室工艺。 

发明内容

本发明的目的在于针对现有紫杉醇提取工艺复杂、设备要求高、成本高的技术不足，提供一种从红豆杉中提取紫杉醇的方法，简捷、低成本；进一步地，本发明在简捷、低成本地制备得到紫杉醇并同时保证紫杉醇的高产率、高回收率及高纯度，能很好地作为抗癌药品满足临床使用。 

本发明的另一个目的提供所述方法制备得到紫杉醇。 

本发明通过以下技术方案实现上述目的： 

提供一种从红豆杉中提取紫杉醇的方法，包括以下步骤：

（1）用甲醇水溶液于40～50℃温浸提取粉碎后的红豆杉树皮或枝叶（红豆杉树皮或枝叶的粗粉），将提取液减压回收得浸膏，加氯仿萃取浸膏后取氯仿萃取层减压回收至干；

（2）200～300目硅胶干法装柱，氯仿预平衡后用步骤（1）减压回收至干所得的产品掺入与产品等质量的200～300目硅胶上样，氯仿-甲醇梯度洗脱，TLC检识到紫杉醇后收集含有紫杉醇的洗脱流份；

（3）200～300目硅胶干法装柱，正己烷平衡后用步骤（2）洗脱流份上样，正己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，TLC及HPLC检识到紫杉醇后收集含有紫杉醇的洗脱流份，减压回收至干得紫杉醇粗品。

本发明技术方案采用正相色谱分离法，通过对提取溶剂、提取方案等整体技术方案的优化，不使用本技术领域现有技术采用的高压液相色谱柱，也不采用C18固定相，使用常压液相色谱柱，并以工业硅胶为固定相，在保证提取质量的同时，将生产成本控制在较低的水平，适用于大规模工业化生产。本发明经过上述步骤（1）、（2）和（3）的提取，提取物中紫杉醇的含量就已经达到45%～55%。