[发明专利]一种注射用益气复脉冻干粉提取物的甲酯化方法

说明书

技术领域

本发明属于中药与化学领域，特别涉及一种注射用益气复脉冻干粉提取物的甲酯化方法。

背景技术

注射用益气复脉冻干粉是由红参、麦冬、五味子制成的用于静脉滴注的中药复方制剂，具有益气复脉，养阴生津的疗效。主要用于冠心病劳累性心绞痛气阴两虚证，症见胸痹心痛，心悸气短、倦怠懒言、头晕目眩、面色少华、舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代；冠心病所致慢性左心功能不全II、III级气阴两虚证，症见心悸、气短甚则气急喘促，胸闷隐痛，时作时止，倦怠乏力，面色苍白，动则汗出，舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代。

注射用益气复脉冻干粉的性状为浅黄色的疏松块状物；有引湿性。取1瓶内容物，加水2～3ml溶解后，为棕红色澄明液体。

注射用益气复脉冻干粉中化学成分正不断深入研究，注射用益气复脉冻干粉经过大孔吸附树脂吸附，用碱醇洗脱得到的洗脱液中，含有脂肪酸类物质，对这些物质进行化学分析可以获得注射用益气复脉冻干粉中的有效成分的信息。但由于脂肪酸类物质的沸点较高，不宜直接采用气相色谱法（GC）进行分析。一般都是将其进行甲酯化衍生化降低沸点后，再通过GC分离测定所含有的脂肪酸信息。

常用的甲酯化方法分为酸催化、碱催化两大类。每种方法各有其优缺点，且使用范围各不相同。而许多文献和参考资料中使用的酸碱浓度、萃取溶剂等也有较大差异。因此，选择方便、快捷的、稳定、反应完全的甲酯化方法对注射用益气复脉冻干粉中的脂肪酸进行GC法分析至关重要。

发明内容

本发明提供一种注射用益气复脉冻干粉提取物的甲酯化方法，包括以下步骤：

步骤1，注射用益气复脉冻干粉碱醇洗脱部分的制备；

步骤2，将步骤1所述注射用益气复脉冻干粉碱醇洗脱部分制备成注射用益气复脉冻干粉提取物；

步骤3，将步骤2所述注射用益气复脉冻干粉提取物和甲醇在酸性或碱性条件下进行甲酯化反应。

根据本发明实施方式之一，步骤1所述注射用益气复脉冻干粉碱醇部分的制备方法如下：

取注射用益气复脉冻干粉上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用碱醇溶液洗脱，收集该碱醇洗脱液，浓缩干燥即得注射用益气复脉冻干粉碱醇部分。

所述碱醇溶液为0.1-1mol/L NaOH的乙醇溶液，乙醇浓度为15%-35%。优选的碱醇溶液为0.5mol/L NaOH 25%乙醇溶液。

根据本发明另一实施方式，步骤2所述注射用益气复脉冻干粉提取物制备方法如下：

取步骤1所述注射用益气复脉冻干粉碱醇洗脱部分，加氯仿，在20-40℃下超声提取，提取液浓缩即得注射用益气复脉冻干粉提取物。

根据本发明再一实施方式，步骤3所述甲酯化反应，方法如下：

取注射用益气复脉冻干粉提取物，加入甲醇，酸或碱，混合后进行反应，反应完毕，用有机溶剂萃取。

所述酸为1%-25%硫酸，所述碱为1-10%氢氧化钠或氢氧化钾。优选的酸为10%硫酸。

实验证明：酸性或碱性条件下均可生成甲酯化产物，但10%硫酸-甲醇加热回流酯化法酯化效率最高。

所述有机溶剂包括正己烷、氯仿、乙酸乙酯，优选的有机溶剂为乙酸乙酯。

实验证明：萃取溶剂为正己烷时得到的成分极少，且含量较低；而乙酸乙酯萃取物检测成分较多，且亚油酸、棕榈酸等脂肪酸含量较高。

本发明最优选的制备方法见实施例。

本发明的目的在于通过上述制备方法得到所需的脂肪酸甲酯类物质。进一步对这些物质进行检测，检测方法包括气相色谱法，气相色谱-质谱联用法。经过检测可以判断本发明方法中甲酯化的程度和反应进程，进一步分析所测样品中脂肪酸的种类以及含量。

本发明的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：

1材料

1.1仪器

Agilent 5890-5971气相色谱-质谱联用仪，Agilent 6890N气相色谱配7683B自动进样器；AE240型十万分之一电子分析天平（瑞士METTLER公司）；KQ-250DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q超纯水处理系统。

1.2试剂

正己烷，氯仿，乙酸乙酯，氢氧化钾，氯化钠，无水甲醇，浓硫酸，均为分析纯（天津化学试剂有限公司），三氟化硼乙醚（国药集团化学试剂有限公司），水为超纯水。

1.3样品的制备