[发明专利]微波辅助双水相-反胶束萃取分离苦参生物碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物碱的提取方法，尤其涉及微波辅助双水相-反胶束萃取分离苦参生物碱的方法。

背景技术

目前，双水相体系（ATPS）用于中草药有效成分分离纯化的研究报道还较少。林强等利用乙醇/磷酸氢二钾的新型体系萃取甘草中的有效成分，对溶剂、盐的种类等因素进行考察，优化了萃取条件，在最优萃取条件下，甘草酸盐在两相中的分配系数可以达到12.8，收率高达98.3%，方法简单易行。此外，ATPS也被用于黄酮类化合物的提取分离中。张春秀等采用PEG/磷酸盐体系对银杏叶浸提液中的黄酮类化合物进行了分离富集，并对PEG的分子量及浓度，磷酸盐的浓度以及温度对萃取的影响。最终选择了PEG1500，并在25℃下进行萃取，黄酮类化合物的萃取率可达到98.2%。彭胜等采用PEG4000/葡聚糖40000（D40）研究了萃取分离杜仲黄酮的工艺条件，考察了ATPS的形成、相图，以及各影响因素对杜仲黄酮萃取效果的影响。结果表明当质量分数为11%的PEG4000和质量分数为8%的D40最佳萃取工艺条件下，杜仲黄酮的萃取率为75.82%。不难发现，用于萃取纯化分离天然产物有效成分的ATPS多为高聚物/高聚物或高聚物/无机盐等传统的双水相体系，采用低分子量有机溶剂/无机盐的新型双水相体系萃取生物碱类有效成分的研究还未见有报道。

反胶束体系，其中的表面活性剂的极性头排列在一起形成一个极性内核，该核溶解了水后形成“水池”，可通过静电作用力选择性的增溶带异种电荷的物质，且可使目标物与外界的有机溶剂隔绝开来，萃取环境温和，可保持生物活性物质的活性。因此广泛应用于蛋白质和氨基酸等极性物质的分离纯化。

在国外，目前反胶束还是主要用于蛋白质和氨基酸以及核酸等生物大分子的萃取和分离，并逐渐有新反胶束体系被报道。Goto等用AOT/DOLPA混合反胶束萃取α-胰凝乳蛋白酶，发现混合反胶束体系的萃取能力高于单一的AOT反胶束体系。

在国内，反胶束萃取也发展得十分迅速，陈复生等首次应用反胶束萃取技术同时分离花生中的油和蛋白；张洁等采用SDS/异辛烷/正辛醇反胶束体系对大豆蛋白进行萃取，并用响应面实验对影响萃取的因素进行考察和优化，得到了最佳萃取工艺。此外，超声波等也被用于辅助反胶束萃取，孟宪锋等利用超声波辅助AOT/异辛烷反胶束萃取红花饼粕蛋白，分析和讨论了超声萃取时间、温度、饼粕量以及增溶水量W₀对萃取的影响，得到在最优萃取工艺，在最佳萃取工艺下蛋白质萃取率达到58.3%。

目前，反胶束萃取也开始应用于植物小分子有效成分的萃取分离方面的研究。陈明拓等人用AOT/异辛烷反胶束对粗苦参碱中的苦参碱进行了萃取研究，通过正交实验优化萃取工艺和条件，得出影响生物碱萃取的主要因素为水相酸度，次要因素为水相的温度，而反胶束的W₀及离子强度对萃取率的影响较小，在最优萃取工艺下苦参碱的萃取率为70.3%。首次应用反胶束萃取生物碱类有效成分，为生物碱的提取分离提供了新的思路。但该研究仅以AOT反胶束进行了萃取，未考察比较不同反胶束体系对苦参生物碱的萃取，所得萃取率也较低，纯度不高，有待改善和提高。

苦参为豆科槐属植物来源的常用中药，是植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根，含有喹诺里西啶类生物碱、异戊烯基类黄酮和齐墩果烯型三萜等成分。苦参生物碱主要包括苦参碱和氧化苦参碱，此外还含有槐定碱、槐果碱、氧化槐果碱、羟基苦参碱、n-甲基金雀花碱、安那吉碱、巴普叶碱和去氢苦参碱（苦参烯碱）等。

发明内容

本发明的目的在于提供微波辅助双水相-反胶束萃取分离苦参生物碱的方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案为：

微波辅助双水相-反胶束萃取分离苦参生物碱的方法，包括以下步骤：

1)  制备乙醇-硫酸铵双水相萃取剂，其中硫酸铵质量分数为18%，乙醇质量分数为28%；制备SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束萃取剂；

2)  将苦参或山豆根粉碎，与乙醇-硫酸铵双水相萃取剂混合，微波辅助提取，提取液冷却后，离心分相，上相旋干；

3)  旋干后的残渣用酸溶解，水稀释并调节pH至5，得苦参生物总碱水溶液；

4)  将苦参生物总碱水溶液、SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束萃取剂混合，搅拌萃取，静置分相，上层为反胶束层，下层为水相，将反胶束层与KCl溶液混合，搅拌反萃取，静置，合并下层水相，旋蒸，除盐，过滤，洗涤，取滤液旋干，干燥得苦参生物总碱粗品；