[发明专利]包埋-交联磷脂酶A1聚集体用于大豆毛油脱胶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用包埋-交联磷脂酶A₁聚集体对大豆毛油进行脱胶的方法。

背景技术

交联酶聚集体( CLEAs)，是一类新型的固定化酶技术，具有制备简单、酶活回收率高、操作和保存稳定性强等优点，被广泛运用于固定化酶的制备中。近年来，CLEAs技术与材料学、印迹工程、介质工程、反应工程学等相结合取得了一系列新进展，包括载体固定化CLEAs、包埋CLEAs、印迹法CLEAs、多酶CLEAs、CLEAs膜浆反应器等, 在手性分子拆分与合成、抗生素生产等领域取得了一些成果。有些酶的CLEAs相对游离酶的酶活回收率竟超过100%，某些脂酶的交联酶聚集体活性甚至可提高10倍以上。

大豆油含有3%左右的磷脂，它们对油脂制品风味性及在使用时与油的起泡、出脑等现象均有直接关系，脱胶工艺中欲脱除的磷脂大体可分为水化磷脂与非水化磷脂。可水化磷脂是比较容易除掉的,而非水化磷脂用直接水化法难以除去。经过几十年的发展，人们已经推出了传统水化脱胶、简单酸法脱胶、Special脱胶和酶脱胶法等方法，现有主要的大豆毛油脱胶方法是酶脱胶法，酶脱胶法以其良好的经济环保性能而受到越来越多的重视，酶脱胶法可将油中磷含量降到15mg/Kg以下，但是使用游离酶进行脱胶存在一些问题，如温度和pH不易控制，影响脱胶效果等。

发明内容

本发明是针对固定化磷脂酶A₁活性低等问题，而提出的用包埋-交联酶聚集体来固定化磷脂酶A₁，并将该包埋-交联磷脂酶A₁聚集体用于大豆毛油脱胶的方法。包埋-交联磷脂酶A₁聚集体用于大豆毛油脱胶的方法，其特征在于用包埋-交联磷脂酶A₁聚集体对大豆毛油进行脱胶通过以下步骤实现：一、包埋-交联磷脂酶A₁聚集体的制备：将1mL酶加入到pH值为5.0的磷酸二氢钠与柠檬酸缓冲液中，调节酶液浓度为0.02～0.07g/mL，在0℃下缓慢加入饱和度为65～90%的乙醇，在pH为3～8的条件下进行沉淀反应时间30min，持续搅拌，从而保证酶聚集体颗粒均匀，然后于10000r/min离心，收集沉淀；交联磷脂酶A₁聚集体的制备及包埋过程：向聚集体悬浮液中加入体积浓度为0.2%戊二醛，搅拌进行交联反应4h，离心去除上清液，用缓冲液冲洗交联酶聚集体数次，直到洗液中检测不到任何的活性，收集沉淀用磷酸盐缓冲液悬浮；在质量浓度1%的20mL海藻酸钠溶液中加入上述酶聚集体1mL，搅拌均匀，静止5min后，用灭菌后的5mL注射器吸入上述混合液，以约5滴/s注入浓度0.1～0.35mol/L的CaCl₂溶液中制成微胶囊，将形成的微胶囊在4℃的CaCl₂溶液中放置一段时间使其进一步硬化。然后抽滤得到硬化的微胶囊，用无菌生理盐水洗涤3～5次，以洗去表面的CaCl₂，然后进行冷冻干燥，得到包埋-交联磷脂酶A₁聚集体；二、取大豆毛油先经水化脱胶法去除大豆毛油中的水化磷脂，然后向经过处理的大豆毛油中加入质量浓度为35～50%、质量为大豆毛油0.5～2%的柠檬酸溶液并以500～1500r/min的速度搅拌5～20min，再向经过处理的大豆毛油中添加质量浓度为4%的NaOH溶液并不断进行搅拌直至大豆毛油的pH值在4.0～6.0之间，停止添加NaOH溶液；三、在40～60℃条件下向调整好pH值的大豆毛油中加入为调整好pH值的大豆毛油质量的0.1～0.5%的包埋-交联磷脂酶A₁聚集体；四、对加入包埋-交联磷脂酶A₁聚集体的大豆毛油以50～100r/min的速度搅拌1～10h，然后对加入包埋-交联磷脂酶A₁聚集体的大豆毛油以5000～8000r/min的速度离心1～5min，去除重相中的杂质，即实现用包埋-交联磷脂酶A₁聚集体对大豆毛油进行脱胶的工艺。

本发明精炼大豆毛油的方法中包埋-交联磷脂酶A₁聚集体的耐热性得到提高，可以在较宽的pH范围内保持较高的活性，对反应环境的敏感性降低，使得操作条件更容易控制和实施。包埋-交联磷脂酶A₁聚集体可连续反应20h以上，还可以进行回收重复利用，其脱胶效率比现有方法提高了5～25%，经济效益增加1～3%，可进行大规模工业操作。

具体实施方式