[发明专利]一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸B的同时定量方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸B的同时定量方法。

背景技术

归丹沙棘胶囊国家食品药品监督管理局批复的保健食品，批准文号为：国食健字620110772。其保健功能为润肠通便，祛黄褐斑。每1000粒处方组成如下：

何首乌500g  当归500g  苦杏仁400g

沙棘250g  丹参200g

制备工艺：处方中五味药材，取丹参100g，60℃干燥后粉碎，过80目筛，细粉用5kGy剂量的⁶⁰Co辐照灭菌后备用；剩余丹参与沙棘加8倍量75％乙醇，回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.30-1.35(60℃测)的清膏，备用；滤渣及何首乌、当归、苦杏仁加8倍量水，煮提2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.30-1.35(60℃测)的清膏，备用；合并上述两种清膏，65℃减压干燥，将干膏粉碎成细粉，与丹参细粉混合均匀，用85％乙醇制软材，16目筛制粒，55～60℃干燥，整粒，制成胶囊1000粒，即得。

为高质量地确保本品的保健功能，除对胶囊中的总黄酮进行定量测定外，又对何首乌中的二苯乙烯苷和丹参中的丹酚酸B，采用HPLC法，同一流动相，普通的等度洗脱，进行了同时定量测定研究。

查阅文献得知，二苯乙烯苷和丹酚酸B为两类化学结构与性质完全不同的两种有效成分，其含量，都是分别单独测定，二苯乙烯苷的检测波长320nm，流动相是乙腈-水(25∶75)；丹酚酸B的检测波长286nm，流动相是甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)。这样，花费的时间和试剂要比同时测定成倍增加，但测定效率却成倍降低。目前还未查阅到采用同一流动相，同时测定二成分的报道

二苯乙烯苷化学结构式                         丹酚酸B化学结构式

发明内容

本发明正是在上述背景的前提下，为提高检测效率，降低检测成本，减少环境污染，首次采用反相高效液相法，以体积比为23～24∶8～9∶65～67的甲醇-乙腈-1.5％甲酸水溶液为流动相，300nm为检测波长，同时测定了样品中二苯乙烯苷与丹酚酸B的含量。二成分波峰数值都在约60～70万，二苯乙烯苷保留时间5分钟，丹酚酸B保留时间15分钟，分离度良好。

通过方法学考察，二苯乙烯苷进样量在0.0423～0.846μg、丹酚酸B进样量在0.118～2.36μg，与峰面积呈良好的线性关系(见表1、表2、图1、图2)，回归方程分别为：Y＝2263793X-60196，r＝0.9995和Y＝1363675X-31292，r＝0.9998。采用加样回收实验，结果表明：二苯乙烯苷9次测定的平均回收率为99.04％，RSD为0.66％(见表3)；丹酚酸B 9次测定的平均回收率为98.47％，RSD为0.83％(见表4)。精密度(见表5)、稳定性(见表6)、重复性(见表7)、专属性(见图3、4、5)实验均符合方法学要求。适用于金防感冒颗粒中对乙酰氨基酚和绿原酸的同时定量测定。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：

(1)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为23～24∶8～9∶65～67的甲醇-乙腈-1.5％甲酸水溶液为流动相；检测波长为300nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；

(2)对照品溶液制备取二苯乙烯苷与丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成原液，再取原液加70％甲醇制成每1ml含二苯乙烯苷20μg、丹酚酸B30μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液制备取归丹沙棘胶囊内容物适量，研细，取约0.1g，精密称定，置25ml容量瓶中，加入70％甲醇20ml，以功率250w、频率25kHz，超声处理30分钟，放冷，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

(4)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含何首乌以二苯乙烯苷C₂₀H₂₂O₉计，不得少于2.5mg；含丹参以丹酚酸BC₃₆H₃₀O₁₆计，不得少于3.0mg。

本发明的原理如下：