[发明专利]一种用于筛选和评价抗肠道病毒71型药物的融合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于筛选和评价药物的融合蛋白及其应用，特别涉及一种基于化学发光方法筛选和评价抗EV71药物的融合蛋白及其应用。属于生物技术领域。

背景技术

肠病毒71型（enterovirus 71，EV71）是一种重要的神经感染性肠病毒，目前尚没有有效地治疗方法和疫苗。在亚太地区以及全世界范围均有关于EV71病毒感染相关的传染病爆发的报导（AbuBakar,S.,et al..Enterovirus71 outbreak,Brunei.Emerg.Infect.Dis.2009，15:79–82.）。EV71感染主要会造成儿童的皮疹，被称为手足口病（hand-foot-mouth disease，HFMD）。然而，EV71急性感染还会造成严重的神经性疾病以及极高的死亡率。尤其是五岁以下儿童被EV71感染后会伴随神经并发症，包括无菌性脑膜炎、脑干和/或小脑脑炎，以及急性无力肢体麻痹、心肌炎和急性致死出血性肺水肿（Brown,B.A.,M.S.Oberste,J.P.Alexander,Jr.,M.L.Kennett,and M.A.Pallansch.Molecular epidemiology and evolution of enterovirus 71 strainsisolated from 1970 to 1998.J.Virol.1999.73:9969-9975.）。

EV71属于小RNA病毒科，肠道病毒属，是一种非包膜、单正链RNA病毒，基因组RNA包含约7400个核苷酸（nucleotide，nt）。其基因组结构由5’-UTR、3’-UTR、开放读码框（open reading frame，ORF）三部分构成。其中ORF分为P1、P2、P3三个部分，在翻译的过程中，经过EV712A、3C蛋白酶的切割作用，P1编码四个结构蛋白，VP1-VP4，P2编码3个非结构蛋白（2A、2B、2C），P3编码4个非结构蛋白（3A、3B、3C、3D）（Lin,J.Y,et al..Viral and host proteins involved in picornavirus life cycle.J.Biomed.Sci.2009,16:103.）。EV713C蛋白酶的主要切割位点为病毒自身或者宿主细胞内Gln-Gly（Q/G）氨基酸的连接点（（Weng KF,Li ML,Hung C T,Shih SR.Enterovirus 71 3C protease cleaves a novel target CstF-64 and inhibits cellular polyadenylation.PLoS Pathog.2009,5(9):1-13.）。

目前观察和检测EV71的方法除了传统的病毒培养鉴定法外，主要是RT-PCR和免疫学方法，但这些方法操作上均比较复杂，且无法直接观察到细胞或组织中病毒的变化情况，尤其是EV71在体内的感染情况，缺乏理想的评价体系，使得药物抗EV71的作用效果难以作出评估，极大的延缓了药物的研发和筛选，因而建立一种理想的抗EV71药物的筛选评价体系迫在眉睫。

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供通过化学发光观察并检测EV71感染情况的方法，可快速、有效、简便地观察并检测到EV71的感染，为筛选抗EV71药物提供了优良的平台。

发明内容

本发明的目的在于通过EV713C蛋白酶对底物的切割，使重组融合蛋白中的Fluc的N段和C段紧密结合，使其在特异底物作用下发光，从而监测EV71的复制水平，进而提供了一种用于筛选和评价抗EV71药物的融合蛋白。