[发明专利]氧化分解后的白朮挥发油的HPLC指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种中药材中抗癌有效成分指纹图谱的建立方法，具体是一种氧化分解后的白朮挥发油的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的建立方法，属于药物分析技术领域。 

背景技术

白朮为临床常用中药之一，为菊科植物白朮(Atractylodes macrocephala Koid.)的干燥根茎，主产于浙江、安徽等地。白朮挥发油是白朮抗肿瘤活性部位，在白朮中约含1.4%，挥发油中约含40种不同化学物质，含量最高的成分是苍术酮，占挥发油总量的60%。 

目前，多采用气相色谱法对白朮挥发油中的化学成分及其相对含量进行分析。但是，白朮挥发油与其他药材挥发油明显不同，白朮挥发油中苍朮酮的性质不稳定，易发生氧化分解，采用气相色谱对白朮挥发油进行分析测定过程中，测定程序的升温过程会对挥发油中不稳定成分及苍朮酮的稳定造成影响，氧化分解前、后的GS-MS色谱图明显不同。查阅文献可知，有采用HPLC法，对氧化分解前白朮挥发油中单一成分—苍朮酮的定量分析；在指纹图谱的研究中，有报道采用GS法探讨了不同提取方法得到的挥发油其色谱结果差异；采用直观推导式演进特征投影算法，比较不同产地白朮挥发油GS-MS数据，以白朮挥发油质控表征白术药材的质量控制；采用高效毛细管电泳法比较了不同产地白朮药材指纹图谱差异，建立白朮药材指纹图谱分析方法。 

目前白朮挥发油药用研究主要是集中在氧化分解前的白朮挥发油，焦点是如何阻止其中含量多、性质不稳定成分—苍朮酮的氧化分解。但是上述对氧化分解前白朮挥发油的质量评价方式单一，不足以系统、全面的表明氧化分解后的白朮挥发油的整体质量，亟需探索可全面反映氧化分解后的白朮挥发油质量的标准控制手段。 

发明内容

本发明旨在提供一种氧化分解后的白朮挥发油的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的建立方法，为氧化分解后的白朮挥发油的药用原料、产品生产工艺流程中的各个步骤的质量控制提供依据。 

本发明是通过以下技术方案实现的：氧化分解后的白朮挥发油的HPLC指纹图谱的建立方法，所述的氧化分解后的白朮挥发油为：由白朮药材中提取得到的白朮挥发油经氧化分解后，其中苍朮酮的分解率达100%的白朮挥发油，所述的建立方法包括以下步骤： 

（1）供试品溶液的制备：精密称取氧化分解后的白朮挥发油供试品，用乙腈溶解配制成1.5mg·mL^-1的溶液，此溶液为供试品溶液；

（2）混合对照品溶液的制备：用乙腈溶解精密称取的苍朮酮、β-桉叶醇、白朮内酯Ⅰ、白朮内酯Ⅲ，制得混合溶液A；精密称取β-榄香烯，用体积比为1:1的乙腈-乙酸乙酯的溶液溶解，配制成浓度为100μg·mL^-1的溶液B；混合溶液A中加入溶液B，再加入乙腈，配制成苍朮酮0.60mg·mL^-1、β-桉叶醇0.40mg·mL^-1、白朮内酯Ⅰ50μg·mL^-1、白朮内酯Ⅲ40μg·mL^-1、β-榄香烯20μg·mL^-1的混合对照品溶液；

（3）指纹图谱的制作：

色谱条件：Hypersil ODS2色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；检测波长200nm～240nm，流动相流速为1.0mL·min^-1，柱温为室温；流动相A为乙腈，流动相为B为水，流动相A与B的体积比为60:40，采用线性梯度洗脱方式：0-30min，40%B→10%B；30-45min，10%B→10%B；

在上述色谱条件下，精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各5μl进样量，进行高效液相色谱分析，得到氧化分解后的白朮挥发油的指纹图谱。

由白朮中提取得到的白朮挥发油的氧化分解可通过多种方式，例如室外光照及室外非光照下放置，室内适宜温度加热或室内放置等。本发明所述的氧化分解的方式：由白朮中提取得到的白朮挥发油的氧化分解是通过将白朮挥发油置于密闭、透光的玻璃容器中，并将玻璃容器置于室外非光照条件下进行氧化分解。本发明所述的氧化分解方式使得白朮挥发油中的不稳定成分完全氧化分解，氧化分解后的白朮挥发油各成分相对稳定。 

所述的指纹图谱建立方法中进行高效液相色谱分析时，最佳采样时间为40min。 

    所述的白朮挥发油中的苍朮酮的分解率的检测是采用高效液相色谱检测的，所述的检测方法为：