[发明专利]一种利用固定化酵母利用能源甜菜发酵生产乙醇的方法

权利要求书

1.一种利用固定化酵母利用能源甜菜发酵生产乙醇的方法，其特征在于发酵时，在250 mL三角瓶中装入一定量的发酵培养基，接入一定量的固定化酵母种子液到发酵培养基中进行发酵制备菌悬液，然后进行固定化增值培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基：称取已水分平衡的甜菜糊样品80 g；加入20 mL水分高温灭菌，在无菌条件下加入15 mL液体种子及其他的营养元素。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，液体种子培养基：200 g马铃薯，1000 mL水，20 g葡萄糖，3 g无水硫酸镁，1.5 g磷酸二氢钾，自然pH，121℃，灭菌15 min，用于固定化酵母的增殖培养。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，菌悬液的制备方法为：在无菌条件下将酵母菌种接入麦芽汁培养基，放入摇床中在30℃，120 r/min条件下增殖12 h；之后，将增殖后的培养液在无菌条件下用离心管分装，在6000 r/min，4℃下离心10 min弃去上清液，加入适量无菌生理盐水，将其振荡打散以清洗菌体，之后又在相同的条件下离心，再清洗，重复三次，最后一次用无菌水混合菌体制备菌悬液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，固定化方法：取一定质量的湿菌体，将菌体细胞加入海藻酸钠溶液，充分混匀；将海藻酸钠菌体悬液移入10 mL注射器中，适度加力，在无菌条件下将海藻酸钠菌悬液滴入CaCl₂溶液中，在磁力搅拌机的作用下形成固定化小球，常温下静置2 h，捞出用无菌去离子水清洗干净；胶珠捞出冲洗干净，然后浸泡于0.5%壳聚糖溶液三维摇床上振摇，完成与壳聚糖的成膜反应；水洗除去未反应的壳聚糖，将胶珠保存于水中。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于海藻酸钠的浓度为4%。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于最适温度在32℃，发酵周期符合生产要求。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于填充量选择0.3 g/mL时最有利于固定化酵母发酵酒精。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于固定化时间为3 h时最有利于固定化酵母发酵酒精。