[发明专利]血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法

权利要求书

1.血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法，包括以下步骤：

a、根据目标蛋白分子量的大小和溶液组成，用电化学刻蚀法刻蚀一定孔径的多孔硅，将刻蚀后的多孔层从硅基底上剥离下来，进行超声破碎；超声破碎后的悬浊液经过离心干燥后，得到未经修饰的多孔硅颗粒；

b、用化学修饰法对步骤a中得到的多孔硅颗粒进行修饰，制备成可以选择性捕获蛋白质的筛分材料，使其对不同等电点的蛋白质具有特异性的捕获能力；

c、将步骤b中得到的筛分材料3 mg加入到50 uL待检血清中，低温进行振荡吸附0.5~1 h，充分作用后静置，利用多孔硅颗粒的自然沉降作用将富集了低分子量蛋白的多孔硅颗粒从溶液中分离出来；

d、从溶液中分离出的多孔硅颗粒分别用0.2 mmol·L^-1的PB缓冲液和去离子水清洗，去除表面吸附的高丰度蛋白和盐类后，直接滴到MALDI靶上，室温干燥；然后将1 uL有机基质溶液（2-氰基-4-羟基肉桂酸，α-CHCA）点覆在多孔硅颗粒上，室温自然干燥后将制备好的样品送入MALDI-TOF质谱仪检测；

 e、根据质谱结果经数据统计处理后进行分层聚类分析，通过分析结果判断患者的病情。

2.如权利要求1所述的血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法，其特征在于：在步骤b中，将多孔硅颗粒进行臭氧氧化处理5~20分钟，形成表面硅氧键；将氧化后的多孔硅颗粒浸泡在体积浓度为1%的硅烷化试剂与有机溶剂的混合溶液中反应1小时，再在烘箱中110℃干燥15分钟，蒸干后的多孔硅颗粒用乙醇浸泡洗净；根据目标蛋白的分子量选出相应孔径的多孔硅，再根据目标蛋白的性质选择相应的硅烷化试剂进行表面修饰；硅烷化试剂的种类可以采用氨基硅烷化试剂，巯基硅烷化试剂，环氧基硅烷化试剂中的一种。

3.如权利要求1所述的血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法，其特征在于：还包括步骤f，余下的多孔硅颗粒可直接加入电泳缓冲液，进行凝胶电泳分析。

4.如权利要求1所述的血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法，其特征在于：还包括步骤g，使用后的多孔硅颗粒可用蛋白洗脱液洗涤后重复使用。