[发明专利]双功能纳米粒载体及双功能纳米粒制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纳米粒载体和纳米粒制剂的制备方法，具体是一种双功能纳米粒载体及双功能纳米粒制剂的制备方法。

背景技术

靶向纳米给药系统通常可分为主动靶向和被动靶向纳米给药系统。主动靶向给药系统研究的重要方向是利用受体与配基的专一性结合的原理，合成具有主动靶向功能的纳米粒载体。叶酸（Folate）是主动靶向配基中常用的一种，许多肿瘤细胞膜表面都有叶酸受体过度表达。基于这种特殊的作用，可将与叶酸结合的药物载体导入这些肿瘤细胞中。被动靶向纳米给药系统的一个重要的研究方向是根据肿瘤组织微环境的酸碱失衡研制出pH敏感型的载药纳米粒。肿瘤组织微环境的pH值（5.7～7.8，平均值为7.0）低于正常组织（pH=7.4）。在正常的中性pH下，该纳米粒比较稳定，但是当其进入肿瘤组织的偏酸性环境时，粒子会加速崩解，从而快速释放纳米粒中被包载的药物，使药物在肿瘤内达到一个较高的浓度以提高疗效。腙键（-C=N-N-）在生理pH条件下很稳定，但是在弱酸性条件下很快水解，是一种常用的pH敏感型连接段。

事实上，靶向纳米给药系统进入血液后容易被吞噬细胞吞噬，吞噬作用则是通过血液中亲脂性的调理蛋白介导的，将纳米粒直径控制在300nm以下，并用亲水性材料，如聚乙二醇（PEG）进行表面修饰，可减少吞噬细胞对纳米粒的捕获，起到“长循环”的功能。另外，聚乳酸乙醇酸（PLGA）是纳米粒制备的常用载体之一，具有良好的生物相容性，且无毒可生物降解，通过美国FDA认证并被收录美国药典，被广泛应用于制药、医用工程材料领域。

经过对现有技术的检索发现，叶酸主动靶向纳米给药系统治疗肿瘤已见报道。Kin SH,Jeong JH,Chun KW等人公开了一种显正电性的接有叶酸的聚合物PLL-PEG-Folate（Langmuir 2005,21:8852-8857），实验结果证实了叶酸的靶向作用，与对照组相比，KB细胞吸收提高5.7倍，对叶酸受体表达的细胞具有明显选择性。此外，还有Eanaeili F,Ghahremani MH,Ostad SN等人公开的一种载多烯紫杉醇的PLGA叶酸靶向纳米粒（J Drug Target 2008,16:415-423），细胞实验结果显示，纳米粒具有良好的靶向作用。另外，含酸敏感连接段的纳米粒载体也有报道，例如Bae Y，Fukushima S,Harada A等人用腙键把阿霉素连接到PEO-b-p(Asp)的天冬氨酸单元上（Angew Chem Int Engl.2003,42:4640-4643），释放试验结果显示，随着pH值降低，药物释放明显加快。然而，现有研究大多是聚合物和药物之间用酸敏感键连接，大大限制了被包载药物的种类。而且，兼具叶酸和酸敏感键连接基团的双功能纳米粒载体PLGA-PEG-Folate（即：pH敏感型叶酸靶向纳米粒载体PLGA-PEG-Folate）未见报道，这种新型纳米粒载体的研制将为纳米给药系统抗肿瘤治疗提供新思路。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明提供一种双功能纳米粒载体及双功能纳米粒制剂的制备方法。本发明制备的包载硫酸长春新碱的双功能纳米粒制剂的粒径为146.5±7.3nm，具有良好的包封率、载药量和稳定性。

本发明的第一个目的通过以下技术方案实现：

一种制备双功能纳米粒载体的方法，包括以下步骤：

步骤一，在4-二甲氨基吡啶和缩合剂存在的条件下，以PLGA-COOH和对羟基苯甲醛为原料合成带甲醛基的酯；

步骤二，在对甲苯磺酸存在的条件下，带甲醛基的酯与羧基苯肼合成得到带有酸敏感连接段腙键的PLGA衍生物；

步骤三，在N-羟基琥珀酰亚和和缩合剂存在的条件下，使NH₂-PEG-NH₂与所述带有酸敏感连接段腙键的PLGA衍生物轭合；再加入叶酸、NHS和缩合剂，发生再次轭合，得到双功能纳米粒载体PLGA-PEG-Folate。

优选的，所述双功能纳米粒载体PLGA-PEG-Folate中，所述PEG的重均分子量为4000Da，所述PLGA的重均分子量为15000Da。

优选的，所述缩合剂为N,N'-二环己基碳二亚胺。

本发明的另一个目的通过以下技术方案实现：

一种制备包载硫酸长春新碱的双功能纳米粒制剂的方法，包括以下步骤：

步骤一，将硫酸长春新碱溶于Tris-HCl缓冲液，得混合溶液；

步骤二，在超声冰浴条件下，将所述混合溶液滴加到含有所述双功能纳米粒载体的有机溶液中，得到初乳；