[发明专利]一种发酵液中游离细胞的提取工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种发酵液中游离细胞的提取工艺。

背景技术

微生物法丙烯酰胺发酵生产过程主要培养的是一种诺卡氏放线菌，在发酵罐培养达到预期的生物量、酶活力后，需对发酵液进行分离清洗，将发酵液中的诺卡氏放线菌提取出来，送到水合工段，作为催化剂参与水合反应。传统工艺采用将发酵液与一定比例海藻胶混合造粒，形成固定化细胞催化剂，此种方法细菌的利用率低。现较多的采用游离细胞直接水合反应，提高细菌的利用率。因此游离细胞的分离提取成为此技术的关键，一般工艺采用发酵液中添加一定量的絮凝沉降剂，使发酵液中的细菌沉降下来，然后再将沉降下来的菌泥加水反复清洗，此种工艺的缺点是发酵液中的机械杂质及一些有机物与细菌分离不清，造成杂质带入后道水合反应工序。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，本工艺将机械过滤加离心分离加微滤膜过滤清洗耦合，提供一种发酵液中游离细胞的提取工艺。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种发酵液中游离细胞的提取工艺，其特征包括以下步骤：

1）将丙烯酰胺发酵液经过机械过滤器采用滤布过滤，去除发酵液中大颗粒的机械杂质和未消耗的不溶性物质，机械杂质去除率≥99.9%；

2）采用高速碟片式离心机对过滤后的发酵液进行清洗分离，控制分离速度1.5t/h，排渣

周期为4min，除去发酵液中残留的未消耗的有机、无机可溶性营养物质，离心后得到菌液；

3）上述菌液经过真空微滤纤维膜清洗，以纯水为清洗剂，体积比为：10:1，反复清洗2~3次，去除残留的小分子可溶性无机、有机营养物质及不溶物，得到纯净的游离菌体，电导率≤50Us/cm、色度≤10 Hazen，杂质去除率≥99.99%，整个过程游离细菌回收率≥99%。

进一步地，所述的机械过滤器滤膜材料为621号绒滤布复合一层200目尼龙滤布。

本发明的优点在于：本工艺采取机械过滤加离心分离加微滤膜过滤清洗耦合工艺，能够得到纯净的游离菌体，清洗合格的游离菌体电导率≤50Us/cm、色度≤10 Hazen、杂质去除率≥99.99%，整个过程游离细菌回收率≥99%。

具体实施方式

以下实施例仅为了进一步说明本发明，并不限制本发明的内容。

首先将含有诺卡氏放线菌的发酵液经机械过滤器过滤，过滤采用621号绒滤布再复合一层200目的尼龙滤布有效去除发酵液中大颗粒机械杂质及残留的未消耗的不溶性物质，机械杂质去率≥99.9%，除然后用一种5800转/分高速碟片离心机（TID313型）对过滤后的发酵液进行清洗分离，控制分离速度1.5t/h，一个分离排渣周期为4分钟，此过程中去除了99%的发酵液中残留的未消耗的有机、无机可溶性营养物，再将此离心后的菌液用一种真空微滤纤维膜清洗，以纯水为清洗剂，体积比为：10:1  反复清洗2~3次，去除残留的小分子的可溶性无机、有机营养物质及不溶物。经此工艺处理后我们得到纯净的游离菌体电导率≤50Us／cm 、色度≤10 Hazen，杂质去除率≥99.99%，整个过程游离细菌回收率≥99%。

其中，621号绒滤布，出自天津正中织物 ；200目的尼龙滤布，出自天津正中织物。