[发明专利]BIM基因缺失突变检测探针和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种BIM基因缺失突变检测探针和液相芯片。

背景技术

BIM基因存在于人2号染色体上，是一种B细胞白血病/淋巴瘤2（BCL2基因）蛋白家族促凋亡成员。BIM基因表达一个包含BH3（BCL2-homology domain3）结构域的蛋白，通过和Bcl2家族Bcl2-l1，BCL-XL，BCL2A1，MCL1等一些促生长的蛋白相结合抑制肿瘤细胞生长，或者和促进凋亡的蛋白BAX、BAK1相结合促进肿瘤细胞凋亡。BH3结构域是BIM基因发挥作用的关键功能域，研究发现该功能域与TKIs发挥作用密切相关。例如在TKIs药物吉非替尼治疗的非小细胞肺癌（NSCLC）中需要BIM基因的正常表达，并且BH3-类似药物能够明显增强其治疗效果。人类很多激酶表达异常导致的人类肿瘤细胞都会通过抑制BIM基因的表达或者通过MAPK1磷酸化修饰BIM蛋白来保持自身的生长优势。在几乎所有人类肿瘤中BIM基因的激活表达对于TKIs类药物发挥作用是必须的，而抑制BIM基因的表达则会导致TKIs耐药。表明BIM基因在TKIs药物发挥作用过程中发挥重要作用。

目前，BIM基因突变检测方法主要有：Illumina光纤微珠芯片技术、Affymetrix6.0芯片技术。虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，高通量的Affymetrix SNP6.0芯片技术比较成熟,然而该芯片技术对于中低密度的临床诊断型芯片并不合适,很难在同一个反应体系中扩展检测众多生物学性状相关的SNP或标签SNP。另外，Affymetrix SNP6.0芯片主要在表达谱芯片上比较强，物种较多，在SNP芯片上相对较弱，而且检测价格昂贵，并不能满足实际需要。

本发明目标检测的BIM基因突变突变，该序列（SEQ IDNO.16：发生缺少突变后的序列）从第169位碱基开始，有2903位碱基发生了缺失突变，框中序列即为缺失区域，本领域技术人员使用常规技术手段，根据缺失区域前后的碱基组成，在基因库中便能容易获得该缺失区域的碱基组成，因此，本发明目标检测的BIM基因缺失突变的内容是充分公开的。

SEQ ID NO.16BIM基因缺失突变

GTTGGTAGAGTTATCAATTAGGAAACCCAGTACAGAGTCTATTATAATTTAGATTGTACCTCATGATGAAGGCTAACTCAACAAACCCATCAGAACAGACACTGGAACAAAATGACATTTCTAAATACCATCCAGCTCTGTCTTCATAGGCTTCAGTGAGGTAAATCACTGTTCTCCATAGAGGCTGTGCCATTTTACATTCCCACCAACAGGGCACAAGGGTTCCAGTTTCTCCACATACTTACCAACACTTTTTTTTTTTTTTTTTTAACAGTAGTCATCCTAGAGGATATAGGTGATCTTTCACTGTGCTTTGGATTTATATTTACTGGCTTAGATTTGTATGGCCACCACCATAGTCAAGATACAGAACAACTCAACCACAAGGATTTCTCATGATACCTTTTTATAGCCACAGCCACCTCTCTCCCTCTTCCTTGAGCATTTTGTCATATGGTCATTGGTGATTAAA

发明内容

本发明的目的之一是提供一种BIM基因缺失突变检测液相芯片，该液相芯片可用于BIM基因缺失突变检测。

实现上述目的技术方案如下。

一种BIM基因缺失突变检测液相芯片，包括有

A、分别包被有针对BIM基因缺失突变的野生型和突变型检测探针的微球，所述野生型检测探针为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2，所述突变型检测探针为SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4；

B、用于扩增出需要检测的、带有生物素标记的、含有BIM缺失突变基因型的目标序列的引物。

在其中一个实施例中，所述扩增引物为：SEQ ID NO.5—SEQ ID NO.7。

在其中一个实施例中，所述扩增引物生物素标记位于SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7的5’端。

在其中一个实施例中，检测探针与微球连接中间还设有间隔臂序列，更优选地，所述间隔臂序列为20-50个T。