[发明专利]一种寡聚核酸分子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子、利用该寡聚核酸分子分离小分子RNA的方法及用于该方法的试剂盒。

背景技术

目前，小分子RNA-100个核苷酸或更小的RNA分子是极为引人关注的领域，并且在分子治疗领域很有前途。这些小分子RNA主要包括微小RNA分子(microRNA，简写做miRNA)和小干扰RNA分子(small interfering RNA，简写做siRNA)，由于这两种RNA分子都能够与靶mRNA杂交，所以能够调节基因表达。在不同的组织、器官和不同的发育时期，miRNA和/或siRNA的表达是不同的，它们可能在各种生物发育、生理活动、疾病发生过程中起重要的调节作用。这些小分子RNA的错误表达会导致肿瘤、自身免疫性疾病等的发生。因此，对这些小分子RNA的研究，尤其是对它们的定量研究将对它们的生物功能的研究起到重要推动作用。

但是，以目前广泛进行的miRNA的研究为例，无论是Northern blot、miRNA克隆还是实时定量PCR方法，都是使用总RNA作为样品。由于成熟的miRNA分子产生于miRNA前体，与其前体具有共同的序列，因此使用总RNA进行研究必然导致不准确的结果。中国专利申请200480025190.7采用固相支持物如硅膜等吸附的方式分离小分子RNA。中国专利申请200810036769.3公开了一种通过分子筛方法分离小分子核酸的方法，该方法使得具有相同或相近似分子量的核酸分子一起被分离。上述方法虽然可以分离到小分子RNA，但是通常得到的产物中还混杂有其他非靶RNA。

对于miRNA研究来说，一个关键问题就是特异性分离得到这些小分子RNA。因此，本领域仍需提供一种高效特异的分离小分子RNA的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子，通过与特异性的小分子RNA互补配对，实现对目标RNA分子的分离。

本发明涉及以下按顺序编号的段落中定义的主题：

1、一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由连续的两段核酸序列构成，其中第一核酸序列为一发夹结构的通用序列，其3’端区域与第二核酸序列的3’端区域完全或部分互补；第二核酸序列由5’端区域和3’端区域组成，其5’端区域与待分离的小分子RNA序列完全或部分互补，其3’端区域与第一片段的3’端区域完全或部分互补。

2、一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由连续的两段核酸序列构成，其中第一核酸序列为一发夹结构的通用序列，其3’端区域与第二核酸序列的3’端区域完全或部分互补，第一核酸序列与一种可筛选标记物连接，可筛选标记物可标记在寡聚核酸分子的中间位置或末端位置；第二核酸序列由5’端区域和3’端区域组成，其5’端区域与待分离的小分子RNA序列完全或部分互补，其3’端区域与第一片段的3’端区域完全或部分互补。

3、段落1-2任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子为包含至少一个核糖核苷酸(RNA)分子的杂合分子。

4、段落1-3任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端区域和3’端区域之间无间隔序列。

5、段落1-3任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端区域和3’端区域之间包含至少一个碱基的间隔序列。

6、段落1-5任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子为包含化学修饰的寡聚核酸分子，所述修饰为如下的修饰中的至少一种：

(1)对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的修饰；

(1)对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；

(3)对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中碱基的修饰。

7、段落6所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修饰为对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’-OH的修饰。

8、段落6-7任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修饰为所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’-OH被甲氧基或氟取代。

9、段落1-8任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子中包含至少一个锁核酸(LNA)分子。