[发明专利]一种从南极磷虾中提取虾青素二酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从南极磷虾中提取虾青素二酯的方法。

背景技术

南极磷虾（Euphausia superba），又名大磷虾或南极大磷虾，是一种生活在南冰洋的南极洲水域的磷虾。以群集方式生活，有时密度达1万-3万只/m³。它们可能是地球上最成功的动物物种，大约有5-50亿吨（因估量方法不一有较大差异）。南极磷虾渔业每年约10万吨。主要渔业国家为日本和波兰。产物在日本主要用作为料理，而世界其他地方则作为动物饲料及鱼饵。

南极磷虾中含有极少量的游离的虾青素，这是因为虾青素大多和脂肪酸相结合形成虾青素酯，虾青素酯是南极磷虾虾青素的主要存在形式。当从南极磷虾中提取油脂时，虾青素酯便和油一起被提取出来。

虾青素酯又分为虾青素二酯和虾青素一酯。虾青素以及由它形成的二酯和一酯在南极磷虾的一生中的不同时期，不同生存季节，不同生存环境，其虾体内的含量及三者之间存在比例是不一样的。因此可以将三者作为南极磷虾生长代谢研究的标识物之一，可作为成熟虾群捕捞季节定时捕捞、环境定位研究的标识物。由于南极磷虾在捕捞后经冰冻或干燥成干虾或干粉在贮藏过程中虾青素酯常常分解，所以虾青素，虾青素二酯和一酯的含量变化可作为原料新鲜度的指标之一。

虾青素酯比虾青素稳定，虾青素酯和虾青素都有很强的抗氧化作用。因此虾青素二酯，虾青素一酯和虾青素在虾油中的比例和虾油的质量以及货架寿命有关。

但是到目前为止，人们只分离得到虾青素酯和虾青素。尤其虾青素已经生产。但尚未将虾青素二酯从虾青素酯中分离出来。不同种类的虾其虾青素二酯所结合的脂肪酸也不一样。各种虾独有自己的虾青素二酯分子群体。不同虾的虾青素二酯分离制备的参数和方法也有较大差异。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从南极磷虾中提取虾青素二酯的方法，其工艺过程简单易行。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从南极磷虾中提取虾青素二酯的方法，步骤如下：

（1）取1公斤干的南极磷虾，加入5～7升正己烷，搅拌提取1～2h，提取液过滤，反复提取，共提取4～5次，合并滤液；

（2）上述得到的滤液在25～35℃下旋转蒸发去除正己烷，得红色虾油；

（3）向上述得到的红色虾油中加10倍体积的丙酮溶解，过滤得丙酮提取液，在25～35℃下旋转蒸发去除丙酮，得含虾青素二酯的红色虾油样品；

（4）将上述得到的虾青素红色虾油样品用适量石油醚溶解，备用；

（5）称取40～60g的200～300目的柱层析硅胶，在100～120℃下活化12～18h；

（6）按石油醚：乙酸乙酯=10:1～1.2（V/V）的比例配制混合液300mL，作为洗脱液；

（7）取层析柱，用步骤（6）中的混合液和步骤（5）中的硅胶湿法装柱；

（8）取1～3mL步骤（4）的样品上样；

（9）用步骤（6）中的洗脱液按80～100滴/min的速度洗脱，首先洗脱下一个浅黄色的1～2cm的色带，然后有一个8～12cm的黄色带（虾青素二酯带）被洗脱下来，用15mm×150mm的试管接样，在25～30°C下旋转蒸发去除溶剂，即得虾青素二酯。大约洗脱完该带需1.5h。

所述层析柱的规格为2～3cm×30cm。

上述方法得到的虾青素二酯的检测：

将制备的虾青素二酯取1g溶解于甲醇：二氯甲烷=3:1（V/V）的混合溶液中。用10μL的微量点样器取2μL在硅胶GF₂₅₄高效薄层板上点样，以正己烷：丙酮=7：2（V/V）作为展开剂在展开缸内展开6cm。薄层扫描仪灯光显示样品只有一个点，点R_f值为0.89。

上述方法得到的虾青素二酯所含脂肪酸检测：

取制备的虾青素二酯5-10mg，加入1mL10%（体积百分数）浓硫酸-甲醇溶液，于60°C水浴甲酯化15min，冷却后加入1mL正己烷振荡，静置分层。取上清液供GC/MS分析。

分析结果：虾青素二酯含有如下脂肪酸：肉豆蔻酸，14-甲基十五烷酸，棕榈酸，油酸，反-9-十八碳烯酸，8,11-十八碳烯酸，反-11-十八碳烯酸，9,12,15-十八碳三烯酸（亚麻酸），顺-11-二十碳烯酸，7,10,13-十六碳三烯酸，EPA，DHA。其中EPA含量最高为38.465%，DHA次之为20.465%，再者为14-甲基十五烷酸为6.142%。