[发明专利]一种分离、纯化裂壶藻油中DHA和饱和脂肪酸的方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种油脂的分离纯化技术，尤其涉及一种裂壶藻油中DHA和饱和脂肪酸分离纯化的制备方法。

背景技术

DHA是二十二碳六烯酸，俗称“脑黄金”,是一种重要的ω－3多不饱和脂肪酸，是构成脑磷脂的重要成分，具有抗心血管疾病、降血脂、降血压、预防癌症、保护视力、促进智力发育、防治老年痴呆等多种重要生理功能。DHA不足，会导致婴幼儿脑发育障碍，青少年智力低下，中老年脑神经过早退化。DPA即二十二碳五烯酸，同属于ω－3多不饱和脂肪酸，是人类初乳中才有的长链不饱和脂肪酸，它同样是人脑组织的、神经细胞的主要组成成份；与DHA起协同作用，对Ⅱ型糖尿病、类风湿性关节炎、牛皮癣、哮喘病、溃疡性大小肠炎等有较好治疗作用。

裂殖壶菌又称裂壶藻，是破囊壶菌科的一类海洋真菌，积累大量对人体有用的活性物质，如：油脂、色素、角鲨烯等，其中油脂占细胞干重的70% 以上，而且油脂脂肪酸组成比较简单，主要是DHA、DPA和饱和脂肪酸，EPA及其他不饱和脂肪酸含量不到0.5%，其中DHA达到35%-40%。裂殖壶菌的安全性已经得到美国食品和药品部（FDA）的认可，并开发了医药、食品以及饲料等一系列产品。DHA的主要传统来源深海鱼油由于存在DHA含量低，成分复杂、产量低等问题，再加上海洋环境污染的恶化，DHA已无法满足市场需求。且鱼油含有丰富的DHA同时还有大量的EPA，不宜作为婴幼儿及青少年的食品添加成分。再者，目前由于微藻培养需要光照和CO₂，生产工艺繁杂，成本高，利用微藻生产DHA具有局限性。而裂殖壶菌没有上述条件制约，是一种能实现工业化生产DHA的微生物，前景广阔。

近年来，全球已普遍开展裂殖壶菌发酵生产DHA的研究和规模化生产，目前对裂殖壶菌的研究主要是集中在发酵生产方法、油脂提取工艺的改进与选优上，提取出的油脂不仅含有DHA，还有较多的饱和脂肪酸（含量达到30%-40%），无法达到高度纯化的目的。目前，我国对裂殖壶菌油脂中DHA、饱和脂肪酸的分离和纯化研究报道甚少。

发明内容

本发明目的在于提供了一种可规模化生产、产品纯度高的分离、纯化裂壶藻油中DHA和饱和脂肪酸的方法，该方法分离效果好，得到的产品纯度高。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种分离、纯化裂壶藻油中DHA和饱和脂肪酸的方法，即：在氮气保护下，先将裂壶藻油皂化、盐析、酸化，得到游离混合脂肪酸，然后采用尿素包合法分离饱和度不同的脂肪酸，过滤得滤液和固体；滤液经浓缩、萃取得到富含DHA和DPA的多不饱和脂肪酸；固体经酸解浸出、萃取提取饱和脂肪酸以及回收尿素，尿素可循环使用，包括以下步骤： 

（1）制备游离混合脂肪酸

按质量体积比为1∶3-5的比例在裂壶藻油中加入4%的NaOH-95%乙醇溶液，充氮气保护，于50-60℃的水浴搅拌回流1-1.5h，冷却至室温后，加入氯化钠，搅拌、静置、过滤得滤液和固体，滤液弃去，固体加水至完全溶解，用10%盐酸调节pH至2-3，然后加正己烷萃取，取上层有机相，用蒸馏水洗至中性，加无水硫酸钠脱水，抽滤，滤液减压浓缩回收正己烷，得游离混合脂肪酸；

（2）尿素包合处理

按混合脂肪酸质量、尿素质量和95%乙醇体积比为1∶2∶8-12的比例称量，先将尿素加入到95%乙醇溶液中，50-55℃水浴搅拌至尿素完全溶解，然后加入混合脂肪酸，充氮气保护，继续搅拌回流30-40min，自然冷却至25℃后，低温放置，抽滤分离得滤液和晶体；

（3）提取多不饱和脂肪酸

将步骤（2）所得滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩物加2-4倍量体积的水溶解，用10%盐酸调节pH至2-3，然后用正己烷萃取，水相溶液备用，有机相水洗至无尿素，然后加入无水硫酸钠脱水，抽滤，滤液减压浓缩回收正己烷，得到富集后的多不饱和脂肪酸；

（4）提取饱和脂肪酸

将步骤（2）所得的晶体按质量体积比为1∶3-5加入5%的盐酸，于40-50℃水浴中加热至固体完全溶解，冷却至室温后加入正己烷萃取，分离，水相溶液备用，有机相水洗至中性，然后加入无水硫酸钠脱水，抽滤，滤液减压浓缩回收正己烷，得到富集后的饱和脂肪酸；

（5）回收尿素

将步骤（3）与（4）的水相溶液合并，于2-6℃放置结晶2-4 h，抽滤，滤液浓缩至1/4体积后，2-6℃放置二次结晶2-4 h，抽滤，合并两次抽滤所得固体，干燥得到尿素晶体，可循环使用。