[发明专利]一种端粒酶活性检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，包括：

端粒酶底物，能够被端粒酶识别并进行延长反应；

端粒酶逆转录缓冲液，用于延长端粒酶底物的反应；

DNA分子机器工具，包括具有链置换扩增活性的DNA聚合酶和核酸切口酶；

触发DNA分子机器工具的探针，包括3WJ模板、3WJ引物、primer 1和primer 2；

端粒酶底物：3WJ模板：3WJ引物的摩尔比为1:0.5～1.5:0.5～1.5；

3WJ模板由3′端开始包括三部分：第一部分与端粒酶底物的5′端12～16bp的序列相互补，第二部分与3WJ引物3′端5～8bp的碱基互补，第三部分是用于一级扩增的模板，包含一个核酸切口酶的识别位点；

3WJ引物由3′端开始包括三部分，第一部分与3WJ模板的第二部分相互补的序列，第二部分与端粒酶底物3′端2～6bp的序列相互补，第三部分与端粒酶底物的延长部分的序列相互补；

端粒酶底物：primer 1：primer 2的摩尔比为1：5～10:5～10；

primer 1包括两部分，3′端第一部分与primer 2的3'端互补，其长度为5～8个bp；第二部分是与一级扩增产物相互补的序列；

primer 2包括两部分，3′端第一部分与primer 1的第一部分互补；第二部分是用于二级扩增的模板，其长度为15～21bp；

分子信标探针包括一个茎环结构，其两端分别标记有荧光基团和猝灭基团，其环状部分序列与二级扩增产物的序列相互补，分子信标探针的摩尔浓度为primer 2的3～6倍；

DNA分子机器扩增反应缓冲液：10mM Tris-HCl,50mM NaCl,10mMMgCl₂和1mM DDT，pH=7.9。

2.如权利要求1所述的端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的DNA分子机器工具由KF聚合酶和Nt.BbVCI核酸切口酶组成，端粒酶底物的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；

3WJ引物的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；

3WJ模板的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示；

primer 1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示；

primer 2核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示；

分子信标探针的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示，其两端分别标记有荧光基团FAM和淬灭基团DABCYL。

3.如权利要求1所述的端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的3WJ模板的3′端还被磷酸化。