[发明专利]一种基于硅胶基质的原生质体固定方法

权利要求书

1.一种原生质体固定化方法，包括如下步骤：

（1）将原生质体进行海藻酸钙包埋，得到包被有所述原生质体的海藻酸钙珠；

（2）利用硅胶基质通过硅胶溶胶-凝胶法将步骤（1）所得的海藻酸钙珠进行包埋，得到包埋后的硅胶凝胶；

（3）将步骤（2）所得的硅胶凝胶置于可溶性柠檬酸盐溶液中，溶解所述硅胶凝胶中的海藻酸钙成分，得到硅胶包埋的原生质体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述硅胶基质的制备方法为如下（a）或（b）：

（a）以硅酸酯为前体的二步水解法：将硅酸酯在盐酸催化下水解，真空旋转蒸发除去水解产生的醇和部分水后，再和W1溶液以体积比1：2混合，加入甘油作致孔剂，使用前调pH至6～7，得到所述硅胶基质；

（b）酸化硅酸钠水溶液法：将二氧化硅含量为0.41：2.6的硅酸钠水溶液和胶体二氧化硅水溶液等体积混合，用盐酸调节混合溶液pH至6～7，得到硅胶基质；

所述W1溶液的溶质为甘露醇、2-吗啉乙磺酸和KCl，溶剂为水，所述甘露醇在所述W1溶液中的终浓度为0.4～0.5M，所述2-吗啉乙磺酸在所述W1溶液中的终浓度为4mM，所述KCl在所述W1溶液中的终浓度为20mM；所述胶体二氧化硅水溶液是直径为1～5nm的二氧化硅粒子分散在水中所形成的溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法中，调节所述混合溶液pH值采用的盐酸浓度为3.0M。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述可溶性柠檬酸盐溶液为所述可溶性柠檬酸盐的W1溶液，其溶质为所述可溶性柠檬酸盐，溶剂为所述W1溶液，所述可溶性柠檬酸盐在所述可溶性柠檬酸盐溶液中的终浓度为1-2.0g/100ml。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述溶解所述硅胶凝胶中的海藻酸钙成分的溶解时间为45-90分钟。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述溶解所述硅胶凝胶中的海藻酸钙成分的溶解温度为20-25℃。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述原生质体为植物原生质体。