[发明专利]一种梅花染色体的荧光原位杂交方法

权利要求书

1.一种梅花染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于以梅花中期染色体作为靶DNA，以玉米45SrDNA为探针进行梅花染色体荧光原位杂交。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）染色体玻片标本的制备与预处理；

2）探针标记与探针变性；

3）探针与染色体共变性；

4）杂交与杂交后洗脱；

5）信号检测。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述染色体玻片标本的制备为以梅花茎尖为材料，采用去壁低渗火焰干燥法制备。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述预处理为将所述染色体玻片标本干燥，RNaseA、胃蛋白酶K处理，乙醇脱水。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2）中所述探针标记为将30-50ng/μl玉米45SrDNA质粒1-3份、DIG-Nick translation mix或Biotin-Nick translation mix 4份和ddH₂O 13-15份按体积比混合，10-15℃避光反应60-90min，加入EDTA 1份，得探针标记混合液，优选玉米45SrDNA质粒为3份，ddH₂O为13份。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2）中所述探针变性为将所述探针标记混合液1-4份和10mg/ml鲑鱼精溶液4份按体积比混合，60-65℃烘烤；加入50%去离子甲酰胺10份、20×SSC溶液2份、50%DS溶液4份，95℃避光变性10min，得变性探针，优选探针标记混合液为2份。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3）中所述探针与染色体共变性为将变性后的探针加到染色体玻片标本上，共变性，变性温度：85℃，变性时间：2-4min，优选变性时间为3min。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4）中所述杂交为将共变性后的探针与染色体玻片标本于37℃黑暗培养18-24h。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4）中所述杂交后洗脱为将杂交后的染色体玻片标本依次放入2×SSC溶液，洗2×5min；放入2×SSC溶液，42℃恒温10min；放入1×PBS溶液，洗5min。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤5）中所述信号检测为加2mg/ml DAPI荧光染液于染色体玻片标本上，染色时间5-8min，进行检测，优选染色时间5min。