[发明专利]自猪单独分离的肽及其用途

说明书

技术领域

本发明关于一种自猪单独分离的肽，详言之，关于一种具有抑菌及杀菌活性的肽。

背景技术

为解决动物肠道功能失调，使用抗生素为目前最常用的方法，然而过度使用抗生素会造成细菌产生抗药性、药物残留以及环境污染等问题。

抗菌肽(antimicrobial peptide,AMPs)在近年来渐渐受到重视，早在1950年代，就有科学家发现在不同动物的血液中，存在具有抗菌活性的物质，后来发现昆虫巨噬细胞会分泌带正电的AMPs到细胞外以降低细菌感染的机会。1983年，Lehrer和Selsted在兔子肺脏巨噬细胞中纯化出两种具有三对半胱氨酸残基构成二硫键的AMPs，并将其命名为防御素(defensin)。2005年Zilbauer等人发现肠道受细菌感染初期，防御素的量会向上调节提升，此外也有许多证据显示，低浓度或失活的防御素会影响肠内的动态平衡造成肠道慢性疾病，如克隆氏症和溃疡性结肠炎(Wehkamp et al.,2005)。

抗菌肽分布于脊椎动物、非脊椎动物、植物、细菌及真菌，属先天性免疫反应的其中一部分。防御素为AMPs家族之一，具广泛的抗菌活性，以猪肠道防御素(Porcineβ-defensin2,pBD2)为例，许多猪只病原菌对pBD2有很高的感受性。

AMPs具有物理性破坏细菌细胞膜的作用机制，为古老的体内抗菌武器，因此有着极大的潜力可辅助抗生素的使用(Linde等人，2008)，但以化学合成AMPs的费用昂贵，故开发产制AMPs的策略将有前景。

发明内容

为达上述及其它目的，本发明提供一种自猪单独分离的肽，该肽具有序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，且该氨基酸序列含有6个半胱氨酸(cysteine)残基构成的二硫键，其特征在于，该肽用以抑菌及杀菌。

根据本发明，该肽含有36个氨基酸残基，且具有约5至7kDa的分子量。

于具体应用，本发明自猪单独分离的肽可与大肠杆菌(Escherichia coli)或金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的磷脂外膜作用，使其渗透压失衡导致凋亡，因此实现抑菌及杀菌用途。

本发明还提供一种可编码上述肽的核苷酸片段，其具有序列表SEQID NO：2所示的核酸序列。

本发明自猪单独分离的肽可于毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达，经本发明的实例证实，本发明于毕赤酵母中产生的肽具有抗菌效果，且该肽可进一步纯化。

制备本发明自猪单独分离的肽的方法包括下列步骤：将该肽片段的核酸片段构筑于表达载体；将该表达载体转化至毕赤酵母中，以表达该肽片段；以及自该毕赤酵母分离该肽片段。

本发明所用的表达载体可为(但不限于)：pGAPZαA、及pPICZαA，并可将表达载体转化至毕赤酵母中进行重组肽表达，经本发明的实例证实，该重组肽对于大肠杆菌及金黄色葡萄球菌具有抑制效果。

为实现上述抑菌及杀菌目的，本发明另提供一种医药组合物，包括医药有效量的肽及医药上可接受的载剂，其特征在于，该肽为具有序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，且该菌为大肠杆菌及金黄色葡萄球菌。

本发明的医药组合物的形式可为(但不限于)：包埋物、浸泡液、饲料、饲料添加物、口服液、注射疫苗、贴片、粉剂、锭剂、注射液体、悬浮液、外用液、滴剂、擦剂、涂剂、霜剂、油膏、软膏、糊剂、胶以及凝胶。一具体实例中，该医药组合物为霜剂、锭剂或粉剂。

本发明的医药组合物可选用适当载剂，例如(但不限于)：赋形剂、稀释剂、增稠剂、填充剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、油脂或非油脂的基质、表面活性剂、悬浮剂、胶凝剂、辅助剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、着色剂及或香料。