[发明专利]一种长枣抗肿瘤活性多糖的分离纯化制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖的制备方法，尤其涉及一种长枣抗肿瘤活性多糖的分离纯化制备方法。

背景技术

多糖是天然产物中存在的除蛋白质、核酸之外的又一生物活性大分子，作为信息分子决定一些细胞和分子的表型和抗原性结构，控制细胞分裂或分化、调节细胞的生长和衰老，是一种无细胞毒的免疫促进剂。动物体一系列生理和病理过程与糖链参与细胞间的识别有直接关系。一个血红细胞表面就有50万个糖蛋白分子，而人体内免疫球蛋白IgG糖链上单糖组成及糖形的稍微改变就会引发某一疾病，如当糖链中半乳糖低于正常人时就会产生类风湿病。因此，近年来，国内外对天然产物多糖的研究十分重视。天然多糖因其独特的功能和很低的毒性，已在抗肿瘤药、治疗艾滋病等抗病毒药、延缓衰老药等几个方面得到开发和利用。在枣多糖的药理活性研究方面，Yamada等的研究表明从枣中分离纯化得到的多糖具有免疫活性；友田正司的研究表明日本大枣多糖具有抗肿瘤的药理活性；ZhihuiZhao等的研究表明，枣果中的1种中性多糖及4种酸性多糖表现出很好的抗肿瘤活性。国内许多研究表明，枣多糖可增强小鼠腹腔巨噬细胞的活性；能促进小鼠脾细胞增殖；并具有清除体内氧自由基，抗衰老的作用，并且参与了细胞信号传导。

关于枣多糖提取的专利报道近年来主要有：申琳和生吉萍“利用红枣制取枣多糖的方法及枣多糖”(申请号CN201010606048.9)，李进伟和范柳萍“一种金丝小枣酸性多糖提取及结构表征”(申请号CN201010580105.0)，刘东锋、郭琴及杨成东“一种拐枣多糖的制备方法”(申请号CN201010558105.0)，刘玉林、孙曙光及王中山“枣多糖精制方法”(申请号CN201010102224.5)，王青宁、赵秋萍、吕兴连、张飞龙、李澜及王正民“沙枣多糖的提取方法”(申请号CN200910021709.9)，赵玉英“广枣多糖及其制取工艺”(申请号CN200710117623.7)，刘金福、张平平及李托平“冬枣多糖的提取方法”(申请号CN200610014444.6)。这些专利报道极大地丰富了长枣多糖提取纯化手段，但并没有针对长枣这一宁夏特有的优势品种进行研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之不足，提供一种长枣抗肿瘤活性多糖的分离纯化制备方法。

本发明是这样实现的，其工艺步骤是：

一种长枣抗肿瘤活性多糖的分离纯化制备方法，以宁夏产灵武长枣为原料，其工艺过程包括粉碎过筛、水浴浸提、脱色、分离纯化、冷冻干燥，其分离纯化过程为：

1)制备DEAE-52纤维素填充柱：DEAE-52纤维素分别用0.5～1mol/L的氢氧化钠溶液、超纯水、0.5～1mol/L盐酸溶液进行碱洗—酸洗—碱洗—超纯水洗处理，装入填充柱；

2)将经脱色和透析后的提取液通过装有纤维素的填充柱，分别用双蒸水和0.1～0.5mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，每管流速为3～4min，每管收集5ml，用分光度计测定其吸光度至无糖流出，按出峰情况收集组分；

3)透析袋透析除盐，浓缩后醇沉，离心冻干；

4)过DEAE-52凝胶柱进行纯化，得到分级纯化的长枣单一组分多糖(LJU-0，LJU-1，LJU-2，LJU-3，LJU-4，LJU-5)；

上述粉碎过筛是在高速粉碎机上进行，将原料经50～60℃干燥，晾凉后，运用高速粉碎机将原料粉碎，将粉碎好的原料过80目筛，筛上部分返回重复粉碎、过筛；

上述水浴浸提的温度是80～100℃；

上述冷冻干燥是将分离出的多糖液体在真空浓缩机中浓缩至原体积的1/3左右，再进行真空冷冻干燥；

上述脱色是将提取液反复经过活性炭粉末砂芯柱进行脱色，至液体颜色不再发生改变。再加无水乙醇沉出后冻干待用。

本发明的特色在于长枣多糖提取工艺中达到提高提取率、缩短提取时间、减少能耗、有效保存长枣多糖生物活性等目的，并且纯化得到一个单一组分多糖(LJU-3)，本发明弥补了长枣多糖的含量及抗肿瘤活性不清的不足。

应用本发明获得的产品进行了抑制肿瘤细胞增殖实验(MTT法)：