[发明专利]一种人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括PCR混合反应液、肽核酸探针、taqman-MGB探针、用于K-ras基因突变检测的内控正反向引物和探针、用于K-ras基因突变检测的外控正反向引物和探针，以及阳性对照品。

2.根据权利要求1所述的人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述肽核酸探针的序列为SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1所述的人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述PCR混合反应液中含PCR正向引物和反向引物，所述PCR正向引物选自如下所示序列的一种或多种：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，所述PCR反向引物的序列为SEQ ID NO：9所示。

4.根据权利要求1所述的人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述taqman-MGB探针的序列如SEQ ID NO：10所示。

5.根据权利要求1所述的人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述用于K-ras基因突变检测的内控正反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示。

6.根据权利要求1所述的人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述用于K-ras基因突变检测的外控正反向引物和探针的序列分别如SEQ  ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16所示。

7.根据权利要求1所述的人类K-ras基因突变分型荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品是存在K-ras基因第12密码子六种突变类型（GAT，GCT，GTT，GAC，TGT，AGT，CGT）的质粒基因组DNA或/和第13密码子一种突变类型（GAC）的质粒基因组DNA。

8.一种人类K-ras基因突变分型荧光定量的PCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤：在含有PCR反应液的反应体系中加入PCR引物、肽核酸探针、taqman-MGB探针、用于K-ras基因突变检测的内控正反向引物和探针、用于K-ras基因突变检测的外控正反向引物和探针，进行核酸样本的荧光定量PCR检测；

所述肽核酸探针的序列为SEQ ID NO：1所示；

所述PCR引物包括PCR正向引物和PCR反向引物，所述PCR正向引物选自如下所示序列的一种或多种：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，所述PCR反向引物的序列为SEQ ID NO：9所示；

所述taqman-MGB探针的序列如SEQ ID NO：10所示；

所述用于K-ras基因突变检测的内控正反向引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示；

所述用于K-ras基因突变检测的外控正反向引物和探针的序列分别如SEQ  ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16所示。