[发明专利]有机磷农药多残留快速免疫金标试纸条及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及农药残留免疫分析技术领域的一种快速检测器具，特别是涉及以纳米胶体金颗粒标记抗体的甲基对硫磷等8种有机磷农药胶体金快速检测试纸条。 

(二)背景技术

目前，农药残留检测中，仪器检测如气相色谱、高效液相色谱等仍是使用最为广泛的检测技术。然而，这一类传统的检测方法通常需要贵重的仪器设备，并只能在实验室环境中进行。于此相比，免疫检测技术因其简便、灵敏、经济而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。 

免疫检测方法通常分为单残留检测和多残留检测两种，多残留检测通过对检测农药总量的测定而实现多残留检测的目的。也就是说，当检测过程中受测样品中农药总量低于每个待检农药的残留标准，则表明受测样品是合格的。但传统的免疫检测方法，如酶联免疫吸附方法(ELISA)因其反应周期长而制约了其在现场快速检测中的应用。 

本发明的有机磷农药多残留胶体金试纸条，无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。 

(三)发明内容

技术问题本发明的目的克服传统酶联免疫吸附检测技术的不足，研制出一种检测谱广、敏感、快速、简便的有机磷农药多残留快速检测试纸条。 

技术方案一种有机磷农药多残留快速检测试纸条，含有衬板和在衬板上一次衔接的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫。金标结合垫为吸附金标抗体的玻璃纤维棉，在纤维素膜上有用甲基对硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制的直线式隐形检测线，用兔抗鼠IgG印制的直线式隐形对照线，两条线平行组合。 

所述的衬板为不吸水的韧性材料，用硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成。 

所述的样品垫为玻璃纤维棉。 

所述的吸水垫为吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸。 

所述的纤维素膜为硝酸纤维素膜。 

所述的保护膜为不透明的胶膜，样品垫、金标结合垫对应的保护膜上印制有待测样品标记线，该标记线偏向样品垫一侧约0.5厘米处。 

所述的金标抗体为胶体金标记的以O-甲基-O-(4-硝基苯基)-N-(丁酸)硫代磷酸酯为免疫半抗原免疫小鼠而获得的单克隆抗体，所述的偶联甲基对硫磷半抗原的载体蛋白为牛血清白蛋 白，或为鸡卵清蛋白，或为人血清白蛋白。 

有益效果 

1.检测谱宽，操作简便快速：本胶体金试纸条以胶体金标记识别多种农药通用结构的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中的胶体金颗粒与抗体分子之间无共价键，两者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金的标记对单克隆抗体的识别范围和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。并且在使用本胶体金试纸条时，无需任何其他辅助仪器，可现场操作，只要将检测样加入样品垫，在10分钟内即可判定检测结果。 

2.结果显示形象、直观、准确：胶体金试纸条的检测结果以纤维素膜上的显色情况来判断。如果样品中有待测物时，待测物和金标抗体结合形成抗原-金标抗体复合物，并且继续上移，遇检测线不显色或显色很弱即表示检测样品阳性或弱阳性；如果样品中没有待测样品时，金标抗体继续上移，遇检测线显示一条清晰红线即表示检测样品阴性。对照线颜色的有无表示此试纸条有效或无效。结构判定形象、直观、准确、简单明了。 

3.节省费用，使用范围广，便于推广。使用胶体金试纸条进行检测，比使用仪器和ELISA试剂盒检测的费用大幅降低；试纸条的使用范围广，可满足不同层次人员的需要，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济和社会效益。 

具体实施方式

要制备识别甲基对硫磷等8种有机磷农药的快速检测试纸条，首先要制备通用半抗原与载体蛋白的偶联物，用于印制检测线，进而制备金标抗体，用于制备金标抗体纤维棉，其次要制备兔抗鼠IgG抗体，用于制备对照线。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。 

实施例一：(制备实施例) 

1.通用半抗原的合成 

(1)O-甲基-O-(4-硝基苯基)-N-(丁酸)硫代磷酸酯的合成 

称取4-氨基丁酸0.54g(约5.2mmol)、KOH 0.78g(约11.4mmol)，溶解于6mL甲醇中，冰水浴冷却至0-10℃，搅拌下缓慢加入溶解于6mL甲醇溶液的(1)1.19g(约4.2mmol)，保温反应2h。反应完毕后，用石油醚/乙醚(7∶1，体积比)洗涤，水层调pH＝3.0后用乙醚提取，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂，得浅黄色油状物(H1)0.87g(产率为60％)