[发明专利]百合试管小鳞茎诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种百合的快速繁育方法，具体涉及一种百合小鳞茎的诱导方法。

背景技术

长期以来，百合一直以传统的分球、 分珠芽、鳞片扦插、 鳞片包埋等方式进行繁殖，存在繁殖系数小、种性退化、病毒积累等不足。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的就是要提供一种缩短组培苗生产时间，降低成本，有效地脱去植株体内病毒，防止种性退化，培育成本低的百合小鳞茎的诱导方法。

本发明的目的是这样实现的：一种百合小鳞茎的诱导方法，包括以下步骤：

1）鳞片低温处理：选择生长健壮百合鳞茎球，洗净后冷藏7-10天；

2）外植体杀菌：将经低温贮藏的百合鳞茎球剥去外面的1-2层鳞片，选取内部鳞片为外植体，将外植体洗净后在超净工作台上先用酒精浸泡、再用氯化汞液消毒，并用无菌水冲洗后将鳞片置于无菌滤纸上，切成方块接种于分化培养基上启动培养；

3）启动培养：将接种有的外植体的分化培养基置于环境条件为温度25±1℃、湿度75±2%、光照14h、光照强度1800-2000lx的恒温培养室内，培养15天后从百合切口处及腹部边沿脱分化产生白色团状愈伤组织，继续通过20天的培养，白色团状愈伤组织上再分化丛生芽；

4）鳞茎诱导培养：当丛生芽长到3-5cm时，将丛生芽分割成小单芽后进行壮苗培养，将健壮幼苗置于10℃光照培养箱内处理14d，再转接到鳞茎诱导培养基中，将转接有健壮幼苗的鳞茎诱导培养基置于恒温培养室内进行试管内百合小鳞茎诱导，通过45天培养诱导出鳞茎。

步骤2）和3）所述的分化培养基配方是：

Ms+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5g/L。

步骤4）中所述的鳞茎诱导培养基的配方是：

 Ms+6-BA0.5 mg/L +NAA0.1 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂粉5 mg/L。

步骤1）选用外植体鳞茎球低温处理时冰箱的冷藏温度为5℃，时间7-10天。

步骤4）中将转接有健壮幼苗的鳞茎诱导培养基置于恒温培养室内进行试管内百合小鳞茎诱导时，恒温培养室内的温度为10±1℃、湿度75±2%、光照14h、光照强度1800-2000lx.。

本发明提供的百合小鳞茎的诱导方法，具有以下有益效果：

1、百合用经低温贮藏的百合鳞茎为外植体，接种在培养基启动诱导丛生苗；再将丛生苗以10℃低温处理14d后，转接到鳞茎诱导培养基诱导试管小鳞茎，比直接诱导产生丛生芽，试管内不形成健壮小鳞茎移栽成活高，成本费用低。

2、百合直接从试管诱导小鳞茎，可将小鳞茎直接炼苗移栽，大大缩短组培苗生产时间，降低成本。

3、百合通过不断试管继代培养诱导产生小鳞茎，能有效地脱去植株体内病毒，防止种性退化。

具体实施方式

分化培养基制备：以Ms为基本培养基，培养基内添加蔗糖30g/L和琼脂粉5g/L，培养基内的添加的激素组合是：6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.1mg/L；

鳞茎诱导培养基制备：以Ms为基本培养基，培养基内添加蔗糖30g/L和琼脂粉5g/L，培养基内的添加的激素组合是：6-BA0.5 mg/L +NAA0.1 mg/L。

其中：6-BA是6-苄基腺嘌呤、NAA是奈乙酸、IBA是吲哚丁酸。

诱导过程实例：

1）鳞片低温处理：选择生长健壮百合鳞茎球，洗净后置于5℃冰箱进行冷藏7-10天左右；

2）外植体杀菌：将经低温贮藏的鳞茎剥去外面的1-2层鳞片，选取内部鳞片为外植体，将外植体置于5%洗衣粉溶液中浸泡10min并清洗，再置于流水冲洗1h，冲洗后在超净工作台上先用75%酒精浸泡30s，经0.1%升氯化汞液（单位1g/L）消毒15min，再用无菌水冲洗5次，冲洗后的外植体鳞片置于无菌滤纸上，切成1cm²方块接种于分化培养基上启动培养；

3）启动培养：将接种有外植体的分化培养基置于环境条件为温度25±1℃、湿度75±2%、光照14h、光照强度1800-2000lx的恒温培养室内，培养15天后从百合切口处及腹部边沿脱分化产生白色愈伤组织，继续通过20天的培养白色团状愈伤组织上再分化丛生芽；

4）鳞茎诱导培养：当丛生芽长到3-5cm时，分割成小单芽后进行壮苗培养，将健壮幼苗置于10℃光照培养箱内处理14d，再转接到鳞茎诱导培养基后，再置于入恒温培养室进行试管内小鳞茎诱导，恒温培养室内的温度为10±1℃、湿度75±2%、光照14h、光照强度1800-2000lx.。通过45天培养诱导出鳞茎的平均鲜重达到1.4g/个，鳞茎颜色呈乳白色，丛生苗炼苗移栽成活率达到90%以上，小苗生长健壮。