[发明专利]一种高尔基体膜蛋白GP73核酸适配子、其制备方法及其用途有效
| 申请号： | 201210235952.2 | 申请日： | 2012-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN102766632A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | 徐霞;蔡媛媛 | 申请（专利权）人： | 徐霞 |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;C12N15/10;C12Q1/68;A61K31/7088;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;杨磊 |
| 地址： | 510182 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高尔基 膜蛋白 gp73 核酸 配子 制备 方法 及其 用途 | ||
1.一种高尔基体膜蛋白GP73核酸适配子，其特征在于，其核苷酸序列为：5'-ACGCTCGGATGCCACTACAGTTGGTTTTTTTTTGTTATTTAGAGTAAAAACCTTGTGTGTAGTGACTCATGGACGTGCTGGTGAC-3'。
2.一种如权利要求1所述高尔基体膜蛋白GP73核酸适配子的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）随机ssDNA文库的构建：构建人工合成的随机ssDNA文库，文库中所有寡核苷酸分子的两端为固定相同序列，中间为随机序列，随机序列的长度为20-110nt，文库中不同寡核苷酸分子的容量为1014-1015；
（2）将步骤（1）构建的ssDNA文库直接用于筛选，筛选过程包括：靶标的固定、文库与靶标共同孵育、洗涤并弃去未结合的适配子、洗脱并收集结合靶标的适配子、PCR扩增收集的适配子、PCR得到双链DNA转变成ssDNA进行下轮筛选；或者将步骤（1）构建的ssDNA文库反转录成RNA文库，然后用于筛选，筛选过程包括：靶标的固定、文库与靶标共同孵育、洗涤并弃去未结合的适配子、洗脱并收集结合靶标的适配子、将收集到的适配子反转录成ssDNA、PCR扩增收集的适配子、PCR得到双链DNA转变成ssDNA进行下轮筛选；
（3）重复步骤（2）进行8-15轮，即可筛选到高尔基体膜蛋白GP73核酸适配子。
3.如权利要求1所述高尔基体膜蛋白GP73核酸适配子的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中构建的ssDNA文库为全长85bp的单链DNA文库：5'-ACG CTC GGA TGC CAC TAC AG-45n-CTC ATG GAC GTG CTG GTGAC-3'，两端分别为序列固定的20个碱基，中间45个碱基为随机序列，整个文库容量为454。
4.如权利要求1所述高尔基体膜蛋白GP73核酸适配子在制备诊断或治疗肝细胞癌药物中的用途。
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