[发明专利]脑溢血易感性无创检测试剂盒（AGTR1等基因）

说明书

技术领域

本项目属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种脑溢血易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估脑溢血发病的风险级别，为该病的预防提供建议指导。

背景技术

脑溢血（intracerebral hemorrhage，ICH）是指原发性非外伤性脑实质内出血，是危害人类健康的主要疾病之一，发病率约为10-30/10万。全球每年发病200万人，占每年新发卒中的10-15%。流行病学资料表明，脑溢血多发生在40~70岁人群中，其中50岁以上的人群发病率最高，男性的发病率比女性高约25%。脑溢血的发生受到环境与遗传因素的双重影响，越来越多的研究显示，第三代遗传标记——单核苷酸多态性（SNP）与脑溢血，尤其是有家族聚集倾向的脑溢血的关系密切。现有的研究已经明确了一些基因多态性位点与脑溢血的相关性。

脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）基因位于8p22区，共编码475个氨基酸，是体内参与脂质代谢的一个关键酶，其主要功能是参与血浆乳糜微粒（CM）和低密度脂蛋白（LDL）中甘油三酯（TG）的分解，维持血脂的相对稳定。LPL基因存在数十种变异，Hind III酶切多态性是LPL常见变异之一。该多态性位于LPL的第8内含子，为近495位置上发生G代替T的突变，使Hind III酶切位点消失（T→G），因而T和G等位基因又分别被称为H+和H-等位基因。林慧琼等人的研究发现，脑出血组H-等位基因分布频率较对照组多，可能引起H-基因型个体中TG及LDL的升高，导致脑溢血发生的危险性增加，提示脂蛋白脂酶H-等位基因可能是脑溢血发病的危险性因素。

血管紧张素Ⅱ受体-1（AGTR1）是G蛋白偶联受体，主要分布在血管平滑肌和心脏，被血管紧张素Ⅱ激活后主要影响血压和水电解质平衡。AGTR1编码基因位于3q21-q25且只有单一拷贝，其编码区及非编码区存在着多处变异，与临床关系较为密切的变异是AGTR1基因3’端非编码区A1166C多态位点，该位点虽不影响基因的开放阅读框架，但可以参与转录和翻译的调控，从而影响机体内水钠平衡代谢、醛固酮的分泌和血管收缩等，而这些均是导致脑出血的关键因素。国内外研究发现，AGTR1 1166位的AC基因型个体患脑溢血的危险度明显高于AA基因型个体，显示C等位基因可能是脑溢血的易患基因。

三磷酸腺苷结合盒转运子1（ABCA1）基因位于9q22-q31，其编码的ATP结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter 1，ABCA1)是一种整合膜蛋白，以ATP 为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出，后者结合到细胞表面的载脂蛋白，形成新生的高密度脂蛋白（HDL）。由于ABCA1在胆固醇逆转运（RCT）和HDL形成的起始步骤中起重要作用，因此，ABCA1被认为是HDL代谢的限速因子。ABCA1第35外显子的5155位点存在G→A多态性，使第1587位精氨酸（R）变为赖氨酸（K），即R1587K，该突变可导致体内HDL水平降低，血甘油三酯水平上升，增加了脑溢血的发病风险，显示ABCA1 R1587K是脑溢血的一个遗传危险因素。

鉴于LPL基因、AGTR1基因和ABCA1基因在脑溢血发病过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者的单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患脑溢血的高危人群，从而可采取有针对性的预防和治疗措施，这对于降低脑溢血的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于AGTR1基因上A1166C (rs5186)、ABCA1基因上Arg219Lys (rs2230806)、LPL基因上Hind III (rs320)的3个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估脑溢血发病风险级别，本发明提供一种脑溢血基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测AGTR1基因上A1166C (rs5186)、ABCA1基因上Arg219Lys (rs2230806)、LPL基因上Hind III (rs320)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：