[发明专利]抑制PPFIA1基因表达的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种siRNA，特别涉及一种抑制PPFIA1基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

慢性粒细胞性白血病（Chronic Myelogenous leukemia,CML）是一种以粒系增生为主的造血干细胞恶性增殖性疾病，其特征性的细胞遗传学标志是Ph染色体t(9；22)(q34；q11)。P210BCR-ABL融合蛋白是Ph染色体的产物，具有强酪氨酸激酶活性，与CML的发生有着密切的关系，它的产生可导致其下游一系列信号蛋白的持续性磷酸化，由此引起造血干细胞发生恶性增殖、抗凋亡、黏附功能缺陷等病理生理变化。流行病学调查显示，在我国白血病中，CML的发病率为1/10⁵，仅次于急粒和急淋而居第三位，近年来表现出明显的增加趋势。目前，CML的治疗有以下几种方法：1）化疗药物，如马利兰、羟基脲、干扰素等，由于缺乏肿瘤特异性，常造成较大的毒副作用；2）造血干细胞移植（HSCT），这是现今唯一能治愈CML的方法，但是受供者、年龄、病程、经济条件、移植相关病等多种因素的限制，仅有少数患者可以接受；3）甲磺酸伊马替尼（Imatinib mesylate），是第一个成功的特异性抑制酪氨酸激酶的分子靶向药物，在治疗CML上取得了可喜的成就，但其价格昂贵，而且因为耐药性的问题往往导致治疗失败；4）反义技术（反义RNA或DNA）、RNA干扰（RNA interference，RNAi），还未获得肯定疗效（吴国林.医学综述,2006,12(21):1329-1332.）。近20年来，CML的治疗方法有了较大的进展，寻找肿瘤恶性转化的关键“靶标”，以此为基础开发靶向药物与现代化疗药物联合应用日益表现出巨大的治疗潜力，有待于我们进行不断地探索与研究。

PPFIA1基因定位于人类基因组11p13.3，其编码的蛋白质含有1202个氨基酸，分子量为126kDa，属于白细胞共同抗原相关蛋白（leukocyte common antigen-related protein，LAR）-蛋白酪氨酸磷酸酶（protein-tyrosine phosphatase，PTPase）相互作用蛋白家族（Liprin family）。该蛋白N端含有螺旋卷曲结构，C端具有3个SAM（streyl alpha motif）结构域，SAM结构域中含有LH（liprin homology）结构。已有研究发现，SAM结构域可以与多种蛋白、RNA、脂膜相互作用（Feng Qiao,James U.Bowie.Science's STKE:signal transduction knowledge environment,2005,286,re7.）。Serra-Pagès C等的研究发现，PPFIA1可以结合到白细胞共同抗原相关的蛋白酪氨酸磷酸酶（leukocyte common antigen-related protein-tyrosine phosphatase，LAR PTPase）的D2结构域（Serra-Pagès C,Kedersha NL,et al.The EMBO Journal,1995,14(12):2827-2838.）。除了LAR PTPase，PTPase家族中的与其结构类似的PTPδ、PTPσ都可以与PPFIA1相互作用（Pulido R,Serra-Pagès C,et al.Proc Natl Ncad Sci USA,1995,92(25):11686-11690.）。另外，已有研究表明PPFIA1在多种肿瘤中高表达，与肿瘤的发生发展密切相关。Jarvinen的研究小组通过DNA-RNA高密度芯片联合分析发现，在喉癌细胞系中，PPFIA1可能是11q13扩增区的靶基因，同时发现11q13扩增区基因的高水平扩增对PPFIA1RNA的表达影响较大（Jarvien AK,Autio R,Haapa-Paananen S et al.Oncogene,2006,25(52):6997-7008.）。Tan等对头颈鳞癌标本做了类似的DNA-RNA分析也发现到PPFIA1的表达显著上调（Tan KD,Zhu Y,Tan HK et al.Genes Chromosomes Cancer,2008,47(4):353-362.）。V Astro等发现PPFIA1在乳腺癌中存在高水平表达，通过功能研究发现该基因是MDA-MB-231细胞侵袭和迁徙过程的关键分子（AstroV,Asperti C,Cangi G et al.Oncogene,2011,30(15):1841-1849.）。利用微速摄影技术研究发现该基因可以影响细胞的迁徙和伪足数目，但并不会影响伪足覆盖的面积。降低和升高该基因的表达，可以抑制和增强细胞对胞外基质的水解能力。Spangler S A等的研究表明PPFIA1可以与突触小泡锚定和释放过程中的一种功能蛋白结合，对神经元突触结构的组装及稳定性有着一定的影响（Spangler S.A,Hoogenraad C.C.BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS,2007,35(5):1278-1282.）。但是，在慢性粒细胞性白血病中，目前还未见有关PPFIA1基因的研究报道。