[发明专利]包含cFms胞外片段的融合蛋白质及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术，尤其涉及一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质及其制备方法和应用。 

背景技术

白细胞介素-34(IL-34)和巨噬细胞刺激因子(M-CSF)属于细胞生长因子。虽然在DNA序列上没有相似性，它们却共用受体cFms。虽然彼此间有许多生物学功能相似，但与受体结合后所利用的细胞内信号传递通路不完全相同，并且彼此在组织中表达也有差异。 

白细胞介素-34和巨噬细胞刺激因子参与单核细胞/巨噬细胞系细胞的生存、增殖、分化和激活。在免疫反应和炎症中，白细胞介素-34和巨噬细胞刺激因子与其受体(cFms)结合激活单核细胞/巨噬细胞，促进细胞毒性功能，细胞吞噬功能，化学趋向性和细胞因子的产生，调节树突状细胞的功能。IL-34/M-CSF/cFms也在骨骼代谢方面发挥重要作用。IL-34/M-CSF与核因子kappa-B受体配体活化子(RANKL)一道参与人破骨细胞前体的增殖、分化和融合，并参与后期骨质的吸收。 

致炎因子白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNFα)能刺激人成纤维细胞、软骨细胞、类风湿性关节炎(RA)关节滑膜血管内皮细胞生成IL-34和M-CSF。在自身免疫性疾病患者的血浆和关节滑膜液中，IL-34和M-CSF水平明显增高。M-CSF敲除的小鼠(Csflop/op)不能诱发关节炎。在小鼠关节炎模型，应用抗M-CSF抗体或M-CSF抑制剂能减少小鼠关节中巨噬细胞数目及降低IL-1和TNFα水平，抑制破骨细胞形成和激活，减轻骨骼和软骨的破坏，减弱疾病活动性，降低疾病的整体临床评分。 

在骨巨细胞瘤，IL-34表达水平增高，参与RANKL诱导的破骨细胞溶骨作用。给小鼠腹腔内注射外源性IL-34，增加单核细胞/巨噬细胞系分化和增殖，并且诱导破骨细胞分化和骨质吸收，引起骨质疏松。用基因工程方法在M-CSF缺失小鼠 (Csflop/op)体内表达IL-34，可以恢复动物由于M-CSF缺失所致的骨质、破骨细胞、组织巨噬细胞、生育等方面缺陷。在RA病人，TNFα促使成纤维样滑膜细胞产生IL-34，参与破骨细胞的形成和激活。 

除了在自身免疫性炎性疾病中扮演重要角色外，IL-34/M-CSF也在肿瘤生长、发育和转移中起重要作用。M-CSF水平与许多恶性肿瘤的预后相关。在许多恶性肿瘤，血中M-CSF水平增高，肿瘤的预后则差。在肿瘤异种移植模型动物上，抑制cFms则能抑制肿瘤转移导致的溶骨性骨质破坏。 

用细胞毒性疗法(如化学疗法)治疗乳腺癌时，乳腺上皮细胞增加分泌IL-34和M-CSF，通过与受体cFms结合，促进巨噬细胞浸润。在小鼠乳癌模型，联合细胞毒性疗法和cFms受体阻段剂或酪氨酸激酶抑制剂，减少肿瘤相关巨噬细胞(TAM)数量，延长动物的生存率，减慢原发肿瘤的发展和降低肺脏转移。在原发癌组织中，肿瘤相关巨噬细胞数量减少可增加细胞毒性T细胞的数量。而细胞毒性T细胞能增强癌细胞对化疗的敏感性，加强癌症治疗效果。 

cFms受体含有554个氨基酸，分为三个主要区域(参见图1)：5个IgG样胞外结构域(分别记作D1、D2、D3、D4、D5)、一个跨膜区域和一个络氨酸激酶的胞内结构域(UniProtKB/Swiss-Prot entry P07333)。在5个IgG样胞外结构域中，结构域D2和结构域D3与IL-34/M-CSF的结合和功能是必需的，结构域D1与IL-34和M-CSF的稳定结合是必要的。在一定程度上，结构域D4和结构域D5能提高IL-34与cFms的结合及随后引起的细胞内信号传递。 

发明内容

本发明的目的，就是为了提供一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质。 

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fc通过一连接肽相连构成，命名为cFmsECD-Fc；所述cFms受体的细胞外片段由5个IgG样胞外结构域中的至少两个构成，5个IgG样胞外结构域分别记作D1、D2、D3、D4和D5；所述免疫球蛋白Fc来自于IgG1，其编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述连接肽的编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。