[发明专利]新型结核分枝杆菌特异性融合蛋白及其制备和应用有效
| 申请号： | 201210232101.2 | 申请日： | 2012-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN102702360A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 吴雪琼;阳幼荣;梁艳;赵卫国;冯金栋;张俊仙 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三〇九医院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;G01N33/68;C12R1/32 |
| 代理公司： | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 11100 | 代理人： | 刘徐红 |
| 地址： | 100091 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 新型 结核 分枝杆菌 特异性 融合 蛋白 及其 制备 应用 | ||
1.一种新型结核分枝杆菌特异性融合蛋白，其由Rv0057和Rv1352两种蛋白的抗原表位依次连接构成，Rv0057蛋白抗原表位的核苷酸序列如序列表中序列1所示；Rv1352蛋白抗原表位的核苷酸序列如序列表中序列2所示。
2.根据权利要求1所述的新型结核分枝杆菌特异性融合蛋白，其特征在于：所述的Rv0057蛋白的抗原表位位于融合蛋白的氨基端，Rv1352蛋白的抗原表位位于融合蛋白的梭基端。
3.权利要求1或2所述的新型结核分枝杆菌特异性融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：
（1）分析结核分枝杆菌Rv0057、Rv1352的基因序列和蛋白质结构，确定两个蛋白抗原表位融合的区域、组合和顺序；依次将Rv0057和Rv1352蛋白抗原表位连接，形成融合蛋白；Rv0057蛋白的抗原表位位于融合蛋白的氨基端，Rv1352蛋白的抗原表位位于融合蛋白的梭基端；
（2）两个蛋白融合的克隆：
①在Rv0057上游引物添加Nhe I酶切位点，在Rv0057下游引物添加编码3个疏水性氨基酸的DNA序列和Spe I、Xho I酶切位点，将PCR扩增产物用Nhe I和Xho I双酶切后，插入用Nhe I和Xho I双酶切后的pET30aSETB质粒载体中；转化到大肠杆菌DH5α受体菌中；经过质粒提取，经T7正向测序验证，获得核苷酸序列与设计完全一致的重组质粒Rv0057/pET30aSETB；
②在Rv1352上游引物添加Nhe I酶切位点和编码1个疏水性氨基酸的DNA序列，在Rv1352下游引物添加Spe I、Xho I酶切位点，将PCR扩增产物用Nhe I和Xho I双酶切后，插入用Nhe I和Xho I双酶切后的pET30aSETB质粒载体中；转化到大肠杆菌DH5α受体菌中；经过质粒提取，经T7正向测序验证，获得核苷酸序列与设计完全一致的重组质粒Rv1352/pET30aSETB；
③用Spe I和Xho I双酶切Rv0057/pET30aSETB质粒作为载体；用Nhe I和XhoI双酶切Rv1352/pET30aSETB质粒，获得的Rv1352片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒载体中；转化到大肠杆菌BL21（DE3）受体菌中；经过质粒提取，经T7和T7t双向测序验证，获得核苷酸序列与设计完全一致的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB，并使Rv0057蛋白抗原表位与Rv1352蛋白抗原表位之间通过连接臂相联接。
4.权利要求1或2所述的新型结核分枝杆菌特异性融合蛋白在制备结核抗体诊断试剂盒中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军第三〇九医院，未经中国人民解放军第三〇九医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210232101.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种降解壳聚糖的方法
- 下一篇：一种塑料或橡胶加工用抗氧剂的制备方法
