[发明专利]一种分离纯化达托霉素的方法

权利要求书

1.一种分离纯化达托霉素的方法，其特征在于它依次包括如下步骤：

1）陶瓷膜过滤达托霉素发酵液；

2）大孔吸附树脂柱层析；

3）纳滤浓缩；

4）疏水树脂柱层析第一步粗分；

5）离子交换树脂柱层析；

6）疏水树脂柱层析第二步粗分；

7）超滤；

8）冷冻干燥。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述陶瓷膜过滤包括：用纯化水或5%～30%的乙醇将发酵液稀释，控制料液温度范围20～40℃，进行陶瓷膜过滤。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）所述大孔吸附树脂柱的树脂型号为H103，树脂柱径高比1:3～4。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）所述大孔吸附树脂柱吸附包括：控制上样流速1～1.5倍柱体积/小时；上样结束后先用酒精度5%～15%的乙醇冲洗树脂柱直至HPLC检测最后流出液无达托霉素达托霉素穿透，冲洗流速1～1.5倍柱体积/小时，共冲洗5倍柱体积；然后用酒精度60%～80%的乙醇冲洗树脂柱以洗脱达托霉素，流速1～1.5倍柱体积/小时，直到流出液HPLC检测达托霉素单位低于100mg/L，停止洗脱，收集酒精度60%～80%乙醇洗脱收集液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）所述纳滤包括：控制温度在20～30℃，收集纳滤浓缩液，然后向其中加入氯化钠或氯化钾，加入量为每升浓缩液中加入5～20g氯化钠或氯化钾，再用0.5～2mol/L醋酸溶液调pH值至4～5。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中所述疏水树脂柱为LP20mm树脂柱，树脂柱的径高比1:4。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）所述疏水树脂柱层析第一步粗分包括：上样流速控制在0.6～1倍柱体积/小时，上样结束后用10%乙腈进行洗脱，收集达托霉素纯度大于85%的洗脱液。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）所述的离子交换层析的树脂型号NM-Q，树脂柱径高比1:4。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）所述的离子交换层析包括：用0.5～2mol/L氢氧化钠溶液将步骤4）所得收集液调节pH值至7.5，上离子交换树脂柱，上样流速0.5～2.0倍柱体积/小时，用10～30g/L的氯化钠溶液洗脱。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6）中所述疏水树脂柱中的树脂型号XT-30，树脂柱径高比1:4。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6）包括：将步骤5）收集的洗脱液用乙酸调pH值为4.8作为待上样液，上样，上样流速0.5～1.5倍柱体积/小时，上样结束后，用20%乙醇(V/V)（含醋酸铵40～70mmol/L，pH值4～5）冲洗树脂柱3～5倍柱体积，然后用30%乙醇(V/V)（含醋酸铵40～70mmol/L，pH值4～5）冲洗树脂柱3～5倍柱体积，然后用50%乙醇(V/V)（含醋酸铵40～70mmol/L，pH值4～5）进行洗脱，收集达托霉素纯度大于99%的洗脱液。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7）所述的超滤膜用聚醚砜超滤膜，截留分子量3000。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7）所述的超滤使用纯化水清洗超滤浓缩液至乙醇含量在0.05%以下。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤8）包括：先在-60℃～-45℃压力低于20Pa的条件下冷冻2～8小时；然后在-60℃～20℃，压力为20～60Pa条件下冻干50～80小时；最后在20℃～30℃，压力低于10Pa的条件下冻干2～8小时。