[发明专利]抗重组人角质细胞生长因子-2抗体的应用

说明书

技术领域

    本发明属于生物技术领域，具体涉及抗重组人角质细胞生长因子-2 （KGF-2）抗体在治疗银屑病方面的应用。

技术背景

银屑病是一种常见的多发的受多基因控制的慢性炎症性皮肤病，其重要组织病理学的特征性表现为角质形成细胞(keratinocyte,KC)过度增生，棘层增厚以及真皮血管扩张同时伴有炎细胞浸润为主要表现的皮肤病。病因和发病机制尚不完全清楚，考虑与遗传、感染、代谢障碍、内分泌紊乱及免疫因素等有关。关于银屑病的治疗，目前国内外主要有以下几种方法：1，全身用药，口服维甲酸，口服免疫抑制剂如环孢素、雷公藤，静脉给与免疫调节剂等。2，光化学疗法。3，外用制剂，如达力士、皮质类固醇激素和维甲酸类外用药等。4，中医中药口服和外用。近几年，基于银屑病是以淋巴细胞异常活化为始发环节的免疫炎性疾病的理论，人们开发了多种抑制 T 淋巴细胞异常活化和异常活化后释放的各种细胞因子的药物，迄今己出现了与此概念相关的 20 余种用于治疗银屑病的生物制品，其作用机制涵盖了从 T 细胞激活的起始点及各中间环节，如抑制APC的抗原提呈功能、抑制 T 细胞的活化和增殖、抑制 T 细胞粘附、抑制炎症细胞因子的生成或活性、利用细胞因子的免疫调节作用等。这些生物治疗药物较传统的免疫抑制剂选择性高，可通过联合疗法来发挥作用，表现出较好的发展前景。

研究表明，活化的 T 淋巴细胞、炎性细胞、成纤维细胞及相互作用产生的细胞因子和炎症介质是造成银屑病病理生理异常的物质基础，对于这些细胞因子和炎症介质的异常改变，任何对银屑病的病理生理研究和任何治疗药物必然直接或间接地涉及。体内和体外的研究都表明，在银屑病形成过程中，在一些生长因子的作用下KC表现为异常增殖和分化，如表皮生长因子、转化生长因子a和角质细胞生长因子等,其中角质细胞生长因子对KC的异常增殖和分化可能起的KGF、KGFR及NGF和P75NGFR的蛋白表达。结果发现KGF和KGFR。主要表达在银屑病患者皮肤基底层和基底上层，且在银屑病、皮损中的表达强度均显著上调，表明在银屑病表皮角质形成细胞的增生、分化中起重要作用。体外研究显示KGF刺激KC的DNA增长能力较TGF和EGF强2-10倍，同时KGF也能促进KC的迁移。郗彦萍等采用组织切片免疫组化技术检测KGF-2在寻常型银屑病患者皮损、非皮损及正常皮肤中的分布。结果表明，寻常型银屑病皮损、非皮损中KGF-2的阳性检测结果均明显高于对照组，表明KGF-2在银屑病KC异常增殖中起重要的作用。Kovacs等研究也表明。银屑病皮损中激活的淋巴细胞能刺激成纤维细胞产生KGF-2，从而维持KC呈持续过度增殖的状态。

本申请人发明了一种分泌表达重组人角质细胞生长因子-2的制备方法，提供了一种重组人角质细胞生长因子-２的表达载体，它含有分泌信号肽编码序列，能将KGF-2蛋白分泌到细胞周质中进行表达，含有此重组质粒的宿主细胞经低温反复冻融，在不破坏细菌内膜的情况下即可使重组蛋白释放到缓冲液中，不破坏蛋白的活性。其氨基酸序列与天然的人角质细胞生长因子-2相同，申请了中国专利，专利号ZL200810030155.4，并获得了专利权，授权公告号为CN101538571B。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗银屑病的药物，抗重组人角质细胞生长因子-2 （KGF-2）抗体。

抗重组人角质细胞生长因子-2抗体在制备治疗银屑病药品中的应用；

所述的重组人角质细胞生长因子-2是按中国专利 ZL200810030155.4，一种分泌表达重组人角质细胞生长因子-2的制备方法制备的；

所述的抗重组人角质细胞生长因子-2抗体为单克隆抗体。

本发明又一个目的是一种治疗银屑病的药物，它是抗重组人角质细胞生长因子-2抗体的凡士林乳膏；

所述的抗重组人角质细胞生长因子-2抗体的凡士林乳膏浓度为0.047mg/ml-0.189mg/ml。

本发明采用重组人角质细胞生长因子-2免疫小鼠，制备抗KGF-2多克隆抗体及KGF-2单克隆抗体，均对与豚鼠银屑病模型有显著治疗作用，因剂量不同而对银屑病模型产生不同程度的影响，除能抑制角质形成细胞的增值外，尚可通过某种机制抑制真皮内炎症反应。

附图说明

图1 为杂交瘤细胞株2G6腹水SDS-PAGE结果，其中1. Marker ；2、3. 未纯化的腹水；4、5. 纯化后腹水。

图2抗KGF-2单抗的特异性检测结果。

图3 豚鼠动物模型。

图4正常豚鼠耳背皮肤（×40）。