[发明专利]斑点叉尾鮰病毒现场快速检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于水产动物病原检测技术领域，具体涉及一种斑点叉尾鮰病毒（Channel Catfish Virus，简称CCV）的现场快速高灵敏检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

斑点叉尾鮰病毒是一种有囊膜的双链DNA病毒，含囊膜的完整病毒粒子直径为175nm～200nm；其核衣壳为二十面体，直径90nm～105nm。该病毒又称鲴鱼疱疹病毒I型（Ictaluridherpes virus I），国际病毒分类委员会（ICTV）第八次报告的最新病毒分类系统将其归类为疱疹病毒科（Herpes virus）、鲴鱼疱疹病毒属（Ictaluri virus）。研究发现，该病毒主要感染斑点叉尾鲴和鲴鱼两种经济鱼类，患病鱼发病时表现出水肿、眼突出、鳍条和肌肉出血等症状，组织病理学变化为肾管和肾间组织广泛坏死。该病毒引起的斑点叉尾鲴病毒病（Channel Catfish Virus disease，CCVD）是一种严重的、急性致死性传染病，最先报道于美国，目前主要在北美地区流行，其传播速度快、死亡率高，一旦发病就会给斑点叉尾鲴养殖带来严重的经济损失。斑点叉尾鲴在国内的养殖始于上世纪80年代，因养殖效益高，目前已成为我国重要的水产养殖经济鱼类之一；随着养殖规模的扩大以和养殖密度的增加，养殖期间大规模爆发斑点叉尾鮰病毒病的风险也大大增加了。所以研究并建立CCV的快速检测预警技术，加强斑点叉尾鮰苗种和成鱼类检疫以及养殖水体环境的监测，对预防病毒感染，有效切断病毒传播，保障我国斑点叉尾鮰养殖业的健康持续发展就显得尤为迫切和重要。

目前，CCV检测还主要依赖于病毒分离培养、病理切片法、电镜观察法、抗体杂交和PCR检测法。病毒分离培养法需要专门的培养条件及细胞系并且耗时较长，不适于进行预警监测；病理切片法不能直接对病毒进行检测，只能利用发病的组织病理征兆进行检测，并且还局限于在实验室内进行；电子显微镜技术虽然可以直接观察到病毒粒子的存在，但其操作复杂、耗费时间长、准确性低；用抗体杂交检测法检测CCV虽然在速度上优于病理切片法，但其灵敏度较低，在CCV尚未引发感染或感染的极早期很难用抗体法检测出来；CCV的PCR检测法，虽然克服了前面几种方法的缺点，在实验室条件下能实现对CCV的相对快速、准确检测，但由于常规的PCR检测需要昂贵的PCR仪、凝胶电泳和成像系统，使得PCR检测法难以用于现场的快速检测，这大大限制了PCR检测方法在生产中的推广应用。

进行斑点叉尾鮰病毒早期检测并采取预防措施是水产养殖中降低斑点叉尾鮰病毒流行风险、减少发病照成巨额经济损失的有效手段，所以建立简单、快速、高灵敏的检查方法，并开发适于现场应用的斑点叉尾鮰病毒检测试剂盒就尤为必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种斑点叉尾鮰病毒现场快速检测试剂盒及检测方法，即适于生产现场应用、快速、高灵敏度且易操作的斑点叉尾鮰病毒检测方法，并将检测方法标准化，同时将检测试剂集中于规范的试剂盒中，以克服现有技术的不足，使CCV的检测更准确、灵敏、快速、安全和方便。

本发明一个方面是提供用于检测斑点叉尾鮰病毒的引物组，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1-4；具体信息如下：

上游引物1 SEQ ID NO：1：

5'-AGGGAGGTCACCACGAGCATTTTGTCGCGGACAGGGTCATG-3’

下游引物1 SEQ ID NO：2：

5'-TCGCCCTCTGGGTGATCGTTTTTGGGATCTCTCGTGGGGAATG-3’

上游引物2 SEQ ID NO：3：5'-GAGATCGCCATCGGTTCG-3’

下游引物2 SEQ ID NO：4：5'-ACCGGGGCTCCAGTCT-3’。

本发明的另一个方面提供一种用于检测斑点叉尾鮰病毒的试剂盒，包括如下的组分：

（1）采样管，用来盛放、研磨待检样品；

（2）漂洗管，内装蒸馏水；

（3）核酸变性管，内装TE缓冲液；