[发明专利]剪切因子癌蛋白SF2/ASF在制备白血病治疗药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及剪切因子癌蛋白SF2/ASF在制备白血病治疗药物中的应用。

背景技术

选择性剪接是当前肿瘤学的研究热点之一，研究认为它参与了肿瘤的发生过程。SF2/ASF蛋白是一类由SFRS1（Serine/Arginine-rich Splicing Factor1）基因编码的具有典型SR（Serine/Arginine-rich）结构特征的剪接因子，而SR蛋白家族是一类富含精氨酸和丝氨酸序列的结构域蛋白质，不仅参与前体mRNA的组成性剪接，也是选择性剪接的重要调节因子。SR蛋白可调节许多已知原癌基因及肿瘤抑制基因的选择性剪接，于转录后水平激活它们，从而导致细胞的生长和繁殖失控。Yea等报道，转录因子KLF6的异构体KLF6-SV1在肝细胞癌中明显增高，使细胞无限增殖导致肝癌的发生。此外，它们还参与一系列剪接后事件：mRNA核质运输、mRNA衰减和mRNA翻译等。SR蛋白的本质是mRNA代谢的调节因子，一旦功能受到破坏，将导致发育障碍和疾病发生。

SF2/ASF蛋白在蛋白质-蛋白质及蛋白质-RNA互作、胞内定位及运输、以及前体mRNA的选择性剪接中起重要作用。在不同组织中，SF2/ASF的表达受到严格调控，它的表达量对于细胞和机体稳定发挥生理功能具有极其重要的作用。SF2/ASF蛋白的表达量可调控原癌基因Ron的选择性剪接，并在肿瘤浸润时影响细胞的粘着和迁移性。

研究发现SF2/ASF蛋白在许多肿瘤中存在过表达现象。Karni等发现，SF2在各种人类肿瘤中均表达上调，部分是由于SFRS1基因扩增所导致的；在SF2/ASF表达上调的人类肺癌细胞系中恢复SF2/ASF正常表达可逆转细胞系的转化状态；在成纤维细胞中异位高表达SF2/ASF蛋白能够诱导细胞发生转化，导致裸鼠体内形成肿瘤，由此得出SF2/ASF是一个原癌蛋白。

此外，SF2/ASF在mTOR（mammalian target of rapamycin）信号通路中也起着非常重要的作用。现已明确mTOR信号通路在许多肿瘤中被激活，该通路的阻滞剂已作为临床抗癌药物进入临床II期试验。研究发现，SF2/ASF可改变mTOR信号通路的活性，并特异性激活该通路中的mTORC1分支。采用RNAi干扰技术抑制mTOR通路，可去除SF2过表达细胞的致瘤能力。此外，SF2表达上调的肿瘤对mTOR抑制剂具有很高的敏感性。

白血病是儿童时期最常见的恶性肿瘤和最常见的死亡原因。我国每年新发儿童白血病1.5万例左右，其中儿童急性淋巴细胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia，ALL）是最常见的类型，占儿童白血病的75%。20世纪80年代后，由于多药联合强化疗及有力的支持治疗，儿童ALL的治愈率已达80%左右，但近30年来ALL治愈率无明显提高，主要原因是白血病的发病机理至今不明。此外，白血病复发也是重要因素之一。目前儿童白血病的复发率高达15%左右，已成为影响白血病患儿康复的最关键因素，不仅给患儿本身、而且给家庭及社会带来了不可弥补的严重伤害和不和谐因素。

发明内容

本发明的目的是提供一种剪切因子癌蛋白SF2/ASF在制备白血病治疗药物中的应用。所述剪切因子癌蛋白SF2/ASF的全长cDNA如序列表序列10所示，第210-956位为开放阅读框，编码序列表序列9所示的蛋白。

本发明提供抑制或降低剪切因子癌蛋白SF2/ASF表达的可生成小干扰RNA的短发夹RNA，其核苷酸序列由一个茎环序列及两个分别位于所述茎环序列两侧的反向重复序列组成，所述两个反向重复序列分别为序列表序列1和序列表序列2所示序列；或，序列表序列3和序列表序列4所示序列。

本发明还提供由所述短发夹RNA衍生的如下1）或2）的小干扰RNA：

1）一条链的核苷酸序列如序列表序列1所示，另一条链的核苷酸序列如序列表序列2所示；

2）一条链的核苷酸序列如序列表序列3所示，另一条链的核苷酸序列如序列表序列4所示。

本发明还提供所述RNA（即所述短发夹RNA和所述小干扰RNA）的编码基因。

所述基因是由序列表序列5和序列表序列6的单链DNA组成的双链DNA分子，或由序列表序列7和序列表序列8的单链DNA组成的双链DNA分子。

本发明还提供含有所述基因的表达所述RNA（即所述短发夹RNA和所述小干扰RNA）的重组表达载体。