[发明专利]一种依替米星的分离纯化方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种依替米星的分离纯化方法，具体涉及一种使用聚苯乙烯-二乙烯基苯型树脂梯度洗脱分离纯化依替米星的技术。

(二)背景技术

硫酸依替米星(Etimicin Sulfate，89-07)是我国科研人员自行研制的，拥有自主知识产权的高效、低毒、抗耐药菌的新一代半合成氨基糖苷类抗生素。

硫酸依替米星是1-N-乙基庆大霉素C_1a的硫酸盐。而1-N-乙基庆大霉素C_1a是庆大霉素C_1a分子中脱氧链霉胺1-N位被乙基取代的衍生物，乙基的引入使硫酸依替米星对临床分离的多种耐药菌有较好的抗菌作用，同时其毒性副作用也较母核化合物庆大霉素C_1a有明显的降低。由于依替米星和庆大霉素C_1a的理化性质非常相似，这就对两种物质的分离非常高的要求。目前关于依替米星的分离纯化的文献报道较少。中国专利CN1040177C(申请号93112412.3)公开了一种以大孔树脂分离依替米星的方法，但是该方法得到依替米星的纯度只有90％；CN101928312A(申请号201010132963.9)公开了一种依替米星的分离方法，即以弱酸型阳离子树脂为分离填料，用低浓度氨水解析，至出口无旋光时换乙醇进行洗脱，但是此方法的缺点有两点：一是95％乙醇需要量大，并且由于分离过后的乙醇浓度低，不能回收，导致废水中乙醇含量高，污染环境；并且大量95％乙醇的使用，不仅使得回收成本提高，也造成能源的浪费；二是工艺复杂。为此寻找一种节约能源，并且能有效分离依替米星和庆大霉素C_1a的方法，对于工业生产具有重要的意义。

(三)发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺点，通过开发研究一种能对依替米星进行分离纯化的方法，该操作方法简单，并且依替米星产品的纯度在98％以上、得率在85％以上，更适于工业化生产。

本发明的目的可通过如下措施来实现：

本发明提供的聚苯乙烯-二乙烯基苯型树脂分离依替米星的方法，按以下操作步骤进行：

(1)树脂的预处理：每次实验前将400g聚苯乙烯-二乙烯基苯型树脂依次用去离子水(冷水)洗，去离子水(热水)洗，盐酸溶液(V/V4％)洗，去离子水水洗至中性，再分别以氢氧化钠溶液(1mol/L)、及去离子水洗至中性，乙醇清洗树脂；

所述的分离载体聚苯乙烯-二乙烯基苯型树脂的粒径为30～80目；

(2)将步骤(1)中处理好的树脂装于层析柱中；

在此步骤(2)中，所述的层析柱的规格为(500～755)×(40～15)mm，高径比为12.5∶1～55.5∶1；

(3)上样前，用pH2.5～10.0的醋酸盐或硫酸盐溶液平衡层析柱12～36h；

在此步骤(3)中，所述的醋酸盐为醋酸钠或醋酸铵、硫酸盐为硫酸钠或硫酸铵；

(4)平衡结束后，将10mL发酵液加入层析柱上端吸附、并用醋酸盐或硫酸盐溶液进行两次梯度洗脱，直至洗脱到终点，收集的洗脱液经旋转蒸发后得到依替米星产品，并用高效液相色谱法(HPLC)检测其纯度。

在此步骤(4)中，所述的洗脱流速为：0.5～3.5mL/min；

在此步骤(4)中，所述的醋酸盐为醋酸钠或醋酸铵、硫酸盐为硫酸钠或硫酸铵；

在此步骤(4)中，所述的第一次洗脱的醋酸盐或硫酸盐的浓度为0.1～0.4mol/L、pH为3.5～10.0；

在此步骤(4)中，所述的第二次洗脱的醋酸盐或硫酸盐的浓度为0.1～0.4mol/L、pH为2.5～9.5。

(四)具体实施方案

实施例1

分离纯化条件：分离载体聚苯乙烯-二乙烯基苯型树脂的粒径为80目，层析柱：500×40mm，上样前用浓度为0.4mol/L、pH10.0的醋酸铵溶液平衡层析住12h，后取10mL发酵液进行上样，第一次洗脱：0.4mol/L的醋酸铵溶液(pH10.0)，洗脱体积0.5个柱体积；第二次洗脱：0.3mol/L的醋酸铵溶液(pH6.5)，流速：3.5mL/min。按柱体积计，收集上样后第1.5个柱体积的流出液，流出液经后处理得依替米星纯化产品，依替米星的纯度为98.8％，回收率为94.1％。

实施例2