[发明专利]生产尸胺的方法

说明书

本申请是申请日为2007年3月23日、发明名称为“生产尸胺的方法”的中国专利申请200780006903.9(国际申请号PCT/EP2007/052783)的分案申请。

发明领域

本发明涉及生产尸胺的方法。更特别地，本发明涉及重组微生物的用途，所述重组微生物包含生产尸胺所必需的以去调节形式存在的DNA分子。

现有技术

JP 2002223770公开了通过将赖氨酸脱羧基因和/或赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因引入赖氨酸生产微生物来生产尸胺的方法。JP 2004222569公开了通过培养具有赖氨酸脱羧酶活性和高丝氨酸营养缺陷型的重组棒杆菌来生产尸胺。

发明简述

在一方面，本发明提供了通过构建重组微生物并培养所述微生物来生产尸胺的方法，所述重组微生物具有去调节的赖氨酸脱羧酶和至少一种去调节的基因，该基因选自那些在赖氨酸的生物合成途径中所必需的基因。在另一方面，本发明提供了用于生产聚酰胺的方法，其包括如上所述的用于生产尸胺的步骤，并将尸胺与二羧酸相反应。

发明详述

在接下来的说明书中，广泛地使用了大量术语。此处提供了定义来促进对发明的理解。

术语尸胺意味着1,5-二氨基戊烷。

启动子.指导结构基因转录产生mRNA的DNA序列。通常启动子定位于基因的5’区域，邻近结构基因的起始密码子。如果启动子是诱导型启动子，那么转录效率会响应于诱导试剂而提高。相反，如果启动子是组成型启动子，转录效率则不受诱导试剂调节。

增强子.启动子元件.增强子可增加特定基因转录成mRNA的效率，无论增强子相对于转录起始位点的距离或方向。

表达.表达是从结构基因生产多肽的过程。该过程涉及将基因转录成mRNA并将此mRNA翻译成多肽。

克隆载体.DNA分子，例如质粒、粘粒、噬菌粒、或噬菌体，其具有在宿主细胞中自主复制的能力，并可用来转化细胞用于基因操作。克隆载体通常含有一个或少数的限制性内切核酸酶识别位点，外源DNA序列可以确定的形式在不损失载体的必需生物功能的情况下插入这些位点，以及适合用于鉴定和筛选克隆载体转化过的细胞的标志基因。标志基因通常包括那些提供四环素抗性或氨苄青霉素抗性的基因。

表达载体.包含克隆的编码外源蛋白质的结构基因的DNA分子，所述DNA分子提供外源蛋白质在重组体宿主中的表达。通常，将克隆基因的表达置于特定调节序列例如启动子和增强子序列的控制下(即，有效连接)。启动子序列可为组成型的或诱导型的。

重组宿主.重组宿主可以是任何原核的或真核的细胞，其含有克隆载体或表达载体。该术语也意味着包括那些经遗传工程操作的在宿主细胞染色体或基因组中含有克隆基因的原核或真核细胞。合适宿主的例子见Sambrook等人,MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,第二版,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)[″Sambrook]。

如此处所用的，基本纯的蛋白质意味着目的纯化蛋白是基本上无污染的细胞组分，如通过在聚丙烯酰胺-十二烷基硫酸钠凝胶电泳(SDS-PAGE)之后的单条带所证实的。术语“基本上纯的”进一步意味着描述某分子通过本领域技术人员所用的一种或多种纯度或均一性特征来表征是均一的。例如，基本上纯的赖氨酸脱羧酶在某些参数标准的实验偏差内将显示恒定的和可重复的特征，所述参数如下：分子量、色谱迁移、氨基酸组成、氨基酸序列、封闭的或未封闭的N末端、HPLC洗脱图谱、生物活性、和其它此类参数。然而，该术语并不意味着排除赖氨酸脱羧酶与其它化合物的人工的或合成的混合物。另外，该术语并不意味着排除分离自重组宿主的赖氨酸脱羧酶融合蛋白。