[发明专利]一种干燥综合征的抗原表位及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学诊断技术领域，具体涉及一种干燥综合征的抗原表位及其应用。

背景技术

干燥综合征（Sj?gren’s Syndrome，SS）是一种以侵及泪腺和唾液腺等外分泌腺为特征的全身性自身免疫疾病。该病最常见的临床表现为眼干、口干，并可累及肺、肾脏、淋巴系统、血管及肝脏等器官。此病无明显的地区分布差异，可发生于任何年龄，以40-60岁，特别是绝经后的女性居多，男女之比为1:9。在我国的患病率为0.77%，在老年人群中的患病率高达4%，全国有近1000万患者。干燥综合征可分为原发性干燥综合征 (Primary Sjogren’s syndrome)和继发性干燥综合征 (Secondary Sjogren’s syndrome)两类。该病单独发生时，称为原发性干燥综合征；与其它诊断明确的自身免疫性疾病如类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）、系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）等合并存在时，称为继发性干燥综合征。

近年来，人们对干燥综合征的病因及发病机理进行了大量研究，但至今无突破性进展。目前在临床诊断主要依据临床症状和唇腺活检及腮腺造影等有创检查明确诊断，由于患者的医从性差，常常延误诊断，并丧失最佳的治疗时机。虽然诊断标准中包括血清抗SSA（Ro）抗体、抗SSB（La）抗体和抗核抗体(ANA)检测，但它们均特异性和敏感性低，不能作为理想的诊断指标。因此，寻找一种敏感性强、特异性高而又简便易行的血清学检测方法，对干燥综合征的早期诊断及治疗具有重要意义。

大量自身抗体的出现是自身免疫性疾病的重要特征之一，但由于其发病机制尚不明确，难以直接利用自身抗原检测抗体。抗原表位（epitope）是抗原分子中识别、结合抗体的基础，因此是检测抗体的实际有效组分。以抗原表位肽或其模拟肽（mimotope）作为诊断工具有以下几个优势：1）可以提高诊断的灵敏度和特异性，避免了生物大分子易产生的非特异性结合[Deroo S et al (2001) Comb Chem High Throughput Screen 4: 75 - 115]；2）扩大疾病诊断的范围，对于研究较少或难以体外应用的自身抗原如核酸抗原、多糖抗原、脂类抗原，以模拟肽作为天然抗原的替代物进行诊断，也可以获得与天然抗原表位一致的结果[Bruce G （1997） Proc Natl Acad Sci USA 94：1955 – 1960； Jinaping Q et al (1999) Hyridoma 18(1)：103 - 109]；3）多肽制备、应用的成本低、易于质控。因此，自身抗原表位肽或其模拟肽[Meloen RH et al (2000) J Mol Recognit 13: 352 - 359 ]的获得是制备自身抗体的多肽检测试剂的基础。基于噬菌体肽库技术的抗原表位确定技术，仅需要以患者血清样本为靶标，而无需天然的自身抗原信息，可以实现快速和简便筛选，并且成本低、结果可信度高。噬菌体肽库技术的另一个突出特点是，通过筛选可以同时获得某一疾病特异性的多个抗原表位肽，它们可能代表了天然抗原的主要免疫显性基团。天然生物大分子抗原通常由多个抗原表位组成，其中有一些在免疫反应中起着主要作用，被称为“免疫显性基团”，针对完整抗原的抗体主要是针对这些表位的多种“单克隆抗体”组成。以SS患者血清样品为靶标，通过噬菌体肽库筛选，获得SS特异性的抗原表位肽，是获得新型诊断试剂的基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干燥综合征的抗原表位。

本发明的目的还在于提供上述抗原表位的核苷酸序列。

本发明的目的还在于提供一种检测干燥综合征的试剂盒。

本发明的目的还在于提供干燥综合征的抗原表位在制备诊断干燥综合征的药物中的用途。

发明人从10例SS患者血清中制备和纯化得到IgG，然后以线性十二肽库与抗体孵育，经筛选获得了与抗体特异结合的噬菌体克隆。之后通过ELISA确定阳性噬菌体克隆，测定阳性噬菌体克隆展示肽序列。化学合成其中的一个表位肽，命名为SSP, 通过ELISA检测与患者血清的反应情况，表明其能特异的与患者血清中的IgG结合，而不与健康人血清反应。

一种干燥综合征的抗原表位，该抗原表位为多肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO: 1所示。

编码上述干燥综合征的抗原表位的核苷酸序列。