[发明专利]一种治疗骨质疏松多肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，涉及一种治疗骨质疏松多肽的制备方法。尤其涉及一种特立帕肽的制备方法。

背景技术

特立帕肽，英文名为Teriparatide，是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素PTH具有生物活性的N-末端区域的1-34氨基酸片段，分子式为C₁₈₁H₂₉₁N₅₅O₅₁S₂，分子量为4177.77，其肽序为：

1  2  3    4   5   6   7   8   9  10  11  12  13  14  15  16  17   18  19  20H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-21  22   23 24  25  26   27 28  29  30   31 32   33  34Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH。

特立帕肽由美国礼来公司开发，美国食品药品监督管理局于2002年11月26日批准了特立帕肽用于治疗男人和绝经期妇女的具有高度骨折风险的骨质疏松症，也用于治疗男人的原发和或由于性机能减退造成的具有高骨折风险的骨质疏松。特立帕肽是第一种获得美国食品及药物管理局FDA批准的骨形成剂类新药。目前的常规骨质疏松药物一般只是作用于破骨细胞而减缓或阻断骨质流失，而特立帕肽这种甲状旁腺激素的衍生物有增加成骨细胞数目、增强其活性及阻止成骨细胞凋亡的作用。因其可增加成骨细胞的活性及数量，从而可以促进骨生长，用于严重骨质疏松的二线治疗。此外特立帕肽副作用很小，通常只是恶心、眩晕和腿痛性痉挛。因此特立帕肽具有很高的药用价值和广阔的市场前景。

礼来公司是采用基因表达得到特立帕肽。此外也有多篇基因表达得到特立帕肽的专利如US6590081，然而基因表达有着工作量大、三废严重、无法大规模生产等缺点。

目前，还有一种比较流行的方法是固相逐步合成（SPPS）方法，该方法具有操作简单、设备要求低等特点。但是由于特立帕肽由34个氨基酸组成，固相逐步合成方法产品收率低，而且产品纯化困难，不易得到高纯度的特立帕肽。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种收率高的特立帕肽的制备方法，所述方法制得的特立帕肽纯度高，适合于特立帕肽的大规模生产。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种特立帕肽的制备方法，制备组成特立帕肽的各肽树脂片段，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联得到特立帕肽树脂，然后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。

本发明所述特立帕肽的制备方法采用不同片段偶联策略，通过固相合成组成特立帕肽的各肽树脂片段，然后以合适的树脂为载体，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联得到特立帕肽树脂，最后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。本发明所述组成特立帕肽的各肽树脂片段的合成可以同时进行，使合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终制备得到特立帕肽产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于特立帕肽的大规模生产。

特立帕肽由34个氨基酸残基组成，因此存在海量的可能片段和偶联顺序。在一个具体实施方式中，将组成特立帕肽的34个氨基酸残基分为5个片段，即特立帕肽序列1-6位氨基酸、序列7-12位氨基酸、序列13-20位氨基酸、序列21-25位氨基酸、序列26-34位氨基酸。所述制备方法具体包括以下步骤：

A）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段1、侧链保护肽片段2，侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5，其中所述肽树脂片段1为特立帕肽序列34-26位氨基酸，所述侧链保护肽片段2为特立帕肽序列25-21位氨基酸，所述侧链保护肽片段3为特立帕肽序列20-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段4为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段5为特立帕肽序列6-1位氨基酸；

B）将侧链保护肽片段2和肽树脂片段1偶联得到肽树脂Ⅰ；

C)将侧链保护肽片段3和肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ；

D)将侧链保护肽片段4和肽树脂Ⅱ偶联得到肽树脂Ⅲ；

E)将侧链保护肽片段5和肽树脂Ⅲ偶联得到肽树脂Ⅳ；

F)肽树脂Ⅳ裂解得到特立帕肽粗品

G）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。