[发明专利]鸭I型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重PCR试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组、试剂盒及其应用，特别涉及一种鉴定或辅助鉴定番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒的引物对组、试剂盒及其应用。

背景技术

鸭I型肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus type I，DHV I）是雏鸭的一种高度致死性的病毒性传染病的病原。该病主要侵害4周龄以内的雏鸭，死亡率高达90%以上，是危害养鸭业最为严重的传染病之一。鸭圆环病毒（Duck Circovirus，DuCV）是近年来新发现的病毒之一，是在2003年由德国学者Hattermann等首先发现并测定序列的，之后分别在世界各地被发现报道。Soike等发现DuCV在临床上主要使病鸭表现为生长迟缓、羽毛凌乱、体重减轻等症状，更重要的是可感染禽类的免疫系统，引起免疫抑制。番鸭细小病毒(Muscovy duckling parvovirus，MDPV)，是危害番鸭养殖的重要病原，可引起1周龄~3周龄雏番鸭发病，致死率可达到50%~80%。

目前，这三种病毒的传统检测方法有血清中和试验、琼脂扩散试验和ELISA等，但这些检测存在耗时长、敏感性较低、不易标准化等缺点，在实际应用中具有一定的局限性。

PCR技术由于具有敏感性高、特异性好、快速、简便等特点，已经走进临床诊断实验室并广泛应用于各种禽病病原体的检测，包括用于DuCV、MDPV和DHV的检测。三重PCR是一种特殊的PCR形式，其突出特点是，一次PCR反应，能同时检测并鉴别出三种病原体，在临床上具有很高的应用价值。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组可由三个引物对组成，第一个引物对是由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述番鸭细小病毒的引物对1，第二个引物对是由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭圆环病毒的引物对2，第三个引物对是由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭I型肝炎病毒的引物对3。所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。

其中，序列1由20个核苷酸组成；序列2由20个核苷酸组成；序列3由18个核苷酸组成；序列4由21个核苷酸组成；序列5由20个核苷酸组成；序列6由25个核苷酸组成。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组，也可由两个引物对组成，其中一个引物对是由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述番鸭细小病毒的引物对1，另一个引物对是下述两个引物对中的任一个：由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭圆环病毒的引物对2，和由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭I型肝炎病毒的引物对3；所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。

在实际应用中，所述引物对组中的所述引物对1、所述引物对2和所述引物对3在PCR反应体系中的摩尔比为5：5：3；所述引物对1、所述引物对2和所述引物对3中各引物对的两条引物均等摩尔。

在本发明的一个实施例中，所述引物对组中，所述引物对1中的两条引物在PCR反应体系中的终浓度均为0.25μM，所述引物对2中的两条引物在PCR反应体系中的终浓度均为0.25μM，所述引物对3中的两条引物在PCR反应体系中的终浓度均为0.15μM。

本发明的再一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定番鸭细小病毒的引物对。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定番鸭细小病毒的引物对由两条单链DNA组成，所述两条DNA单链分别为序列表中序列1所示的单链DNA，和序列表中序列2所示的单链DNA。

本发明的另一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的试剂盒。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的试剂盒包含上述任一所述的引物对组，或所述的引物对；所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。

上述任一所述的引物对组，或所述的引物对的制备方法也属于本发明的保护范围。

该制备方法包括将上述任一所述的引物对组，或所述的引物对中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

上述PCR试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。