[发明专利]新、支二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

新城疫病毒（Newcastledisease virus,NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。弱毒株仅引起鸡群呼吸道感染和产蛋量下降，但可迅速康复。人类可因接触病禽和活毒疫苗而引起结膜炎或淋巴腺炎，但很快便康复。新城疫病毒被OIE规定为A类疫病，是一种急性、高度接触性传染病，发病率和死亡率都在90%以上，1935年梁英、马闻天等首次证实我国有该病的流行，现在本病被我国列为Ⅰ类疫病。

新城疫病毒的所有毒株都能凝集多种禽类和哺乳动物的红细胞，在病毒的血凝试验中，鸡的红细胞最为常用。该病毒可在9-12日龄的鸡胚绒毛尿囊膜上和尿囊腔中培养。

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bornchistis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bornchistis Virus，IBV）引起的一种急性、接触性、病毒性传染病。该病主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统等，其感染的主要特征是气管锣音、喷嚏和肾脏肿大。此外，该病还可以引起蛋鸡产蛋量下降和蛋品质下降，但死亡率通常较低，雏鸡可由于呼吸道或肾脏的感染而死亡。IBV能在9-11日龄的鸡胚中生长。

近年来，伴随着畜禽养殖规模的不断扩大，生物制品行业也得到了迅速发展，尤其是生物技术的不断更新使疫苗产品的种类显著增加，且品种多样，如多联疫苗，多价疫苗等，而多联疫苗的使用，扩大了一次接种的防病范围，提高了接种效率，减少了接种用器材及劳务费用，有利于免疫计划的安排。现有防治新城疫、传染性支气管炎两种病的二联疫苗只是两种单苗的简单组合，抗原的配比混乱，相容性不好，存在免疫反应的相互干扰现象，并不能达到预期的目的；而且生产工艺简单，生产技术粗糙，造成部分产品污染，抗原组合物中部分抗原效价降低，不能达到生产规程要求。并且目前生产的新城疫、传染性支气管炎二联疫苗中传染性支气管炎病毒对新城疫病毒存在干扰，因此，所生产的二联苗均采用不同鸡胚培养增殖病毒，然后将收获感染的尿囊液混合制备而成，这样就会费时费力，而且提高了成本。

因此，针对现有的鸡新城疫与传染性支气管炎二联灭活疫苗的生产方法，需要改进新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的组分搭配以及生产工艺中的缺陷，使新城疫、传染性支气管炎二联疫苗的免疫效果达到了单苗的效果，甚至超过了单苗的免疫效果，切实达到了一针防多病的目的。

另外，目前，预防和控制家禽传染病除生物安全措施外，主要依靠疫苗免疫，特别是通过油乳剂疫苗的免疫。油性佐剂疫苗是已公认的可有效强化免疫性的疫苗。油乳剂疫苗的生物安全性高，具有用最小量的抗原，最少的接种次数，延长免疫刺激时间，使机体产生足够量的抗体的特点，所以乳化品质优良的油乳剂苗是保证免疫效果的前提。在现有的油乳剂疫苗(简称“油苗”)生产过程中，通常添加2%的硬脂酸铝来增加其稳定性，但其粘度较大引起免疫注射的应激反应较大，如导致严重接种反应、形成无菌性化脓损害和接种部位周围形成肉芽肿等，可产生外部可见的浮肿、肿胀、硬结和坏死。而且人们怀疑在接种部位有残留的可能，这便妨碍了疫苗的使用，这种现象在肉鸡免疫中表现得尤为明显。基于这个原因，使用含有矿物油的油性佐剂的疫苗有时是受到一定限制的。

对于油性佐剂疫苗而言，已知这种疫苗不仅在免疫强化作用方面，而且在疫苗的稳定性方面，都在相当大的程度上受到乳剂类型、所用油性成分以及所结合的表面活性剂种类等因素的影响。尤其就灭活疫苗来说，制备出一种具有在较长时间内能诱导产生充分免疫保护作用，并有着良好再现性的疫苗，是非常困难的。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的生产方法，步骤包括：

1）调整新城疫、传染性支气管炎种毒的浓度，以达到合理搭配；

2）将调整后浓度的新城疫、传染性支气管炎种毒按比例混合；

3）将混合毒种接种于9-11日龄易感鸡胚；

4）孵化，收胚液；

5）将收获的胚液进行灭活；

6）灭活后加入佐剂乳化，即成新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗。