[发明专利]一种检测污泥中四环素类抗性基因tetB的引物序列及方法有效
| 申请号： | 201210207878.3 | 申请日： | 2012-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN102719431A | 公开（公告）日： | 2012-10-10 |
| 发明（设计）人： | 陈红;张明美 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 污泥 四环素 抗性 基因 tetb 引物 序列 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测污泥中四环素类抗性基因tetB的引物序列，其特征在于，包括正向引物和反向引物，其碱基序列为：
正向引物：GGCAGGAAGAATAGCCACTAA；
反向引物：AGCGATCCCACCACCAG。
2.一种利用权利要求1所述的引物序列检测污泥中四环素类抗性基因tetB的方法，其特征在于，包括：
(1)提取待测污泥样品中的DNA，以提取的DNA为模板，用权利要求1所述的正向引物和反向引物进行定量PCR扩增并记录达到荧光阈值时的循环数；
(2)将步骤(1)中得到的循环数参照定量PCR测定目的基因tetB质粒标准品的标准曲线，得到待测污泥样品中四环素类抗性基因tetB的含量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的定量PCR的反应体积为15ul：2ul DNA溶液，7.5ul SYBR Premix Ex Taq溶液，0.3ul ROX Reference溶液，0.3ul浓度为10mM的正向引物，0.3ul浓度为10mM的反向引物，4.6ul ddH2O。
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