[发明专利]抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗体工程技术，具体涉及抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株的单克隆抗体。

背景技术

鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis，IB）是由冠状病毒属的传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，以引起鸡呼吸道感染、肾炎、产蛋下降为主要特征，可引起幼鸡死亡率高达40%，成年鸡感染后产蛋量下降10%-50%，给世界养鸡业带来重大的经济损失。

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）具有多种血清型和多组织嗜性，自1931年最早报道呼吸型IB以来，随后报道了肾型、肠型、生殖道型、腺胃型等传染性支气管炎，至今已经报道的血清型达30余种，近年来新的血清型和变异株仍不断出现，给流行病学的研究和防疫带来了极大地困难，也给养鸡业造成了严重的经济损失。我国的免疫鸡群和非免疫鸡群均易发生嗜肾型IBV的感染，其中已经报道的有嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株、HF2株等。

嗜肾型鸡传染性支气管炎的控制关键之一在于建立快速诊断的方法，目前国内诊断IB的方法仍然是病毒的分离鉴定、血清学试验和分子生物学诊断方法（RT-PCR）等，但这些方法要么费时费力，要么操作过于繁琐，实验室条件要求高，不适于大量临床样品的诊断，难以推广应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够高效分泌抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体的杂交瘤细胞株2G4。

本发明的另一目的是提供杂交瘤细胞株2G4分泌的抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体，该单克隆抗体能够特异性的识别嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株。

本发明的再一目的是提供能够快速，简便，准确地检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒。

本发明提供一种分泌抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体的杂交瘤细胞株2G4，该杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院），其保藏号为CGMCC No.6172，保藏日期为：2012年5月28日，分类命名为分泌抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体的杂交瘤细胞2G4。

本发明提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体。

本发明还提供一种用于检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒，所述试剂盒包括所述抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株单克隆抗体。

本发明嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株（缩写为嗜肾型IBV DS10株）抗原的纯化方式简便可行；杂交瘤细胞株2G4分泌的抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体特异性强，制备方法简单；杂交瘤细胞株2G4能够高效、稳定分泌抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体，效价高达为1:102000，经鉴定该单克隆抗体可以与嗜肾型IBV DS10株特异性结合，出现单一一条反应带，证明抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体是嗜肾型IBV DS10株的特异性抗体。由于该杂交瘤细胞株2G4能够高效的分泌抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体，使得后续的纯化步骤简单而且高效。本发明提供的抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体为嗜肾型IBV的临床快速诊断以及嗜肾型IBV疫苗免疫的快速监测提供了保障。采用本发明的抗嗜肾型IBV DS10株单克隆抗体制备的试剂盒能够快速，简便，准确地检测鸡传染性支气管炎病毒。

 

附图说明

图1表示间接ELISA实验检测杂交瘤细胞株2G4分泌的单克隆抗体的特异性结果。图1中，纵坐标为杂交瘤细胞株2G4分泌的单克隆抗体与不同病毒反应后酶标仪检测的OD₄₅₀值，AIV（H9）为禽流感（H9亚型）病毒，IBDV为鸡传染性法氏囊病毒，EDSV为鸡减蛋综合征病毒，NDV为鸡新城疫病毒，IBV（DS10）为嗜肾型IBV DS10株病毒，阴性为阴性SPF尿囊液，PBS为PBS缓冲液对照。

具体实施方式

实施例一 嗜肾型IBV DS10株的繁殖、纯化

1、嗜肾型IBV DS10株

嗜肾型IBV DS10株，2010年6月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏号为：CGMCC  No.3957。

2、嗜肾型IBV DS10株的繁殖