[发明专利]一种羟基红花黄色素A的制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法和应用，具体地说，涉及从中药材红花中提取羟基红花黄色素A的制备方法。属于天然药物化学领域。

背景技术

红花为菊科红花属植物红花的干燥花，具有活血止痛的功效。红花活血的有效成分主要集中在水溶性的红花黄色素。红花黄色素是三种水溶性成分的混合物，即羟基红花黄色素A、羟基红花黄色素B和羟基红花黄色素C。其中，羟基红花黄色素A是含量最高的，而且是红花药理功效的最有效水溶性成分。

现有技术中，关于羟基红花黄色素A的药理作用、临床药物制剂已有很多报道。从红花药材中提取、分离和纯化羟基红花黄色素A的方法，也有很多报道。CN1475272公开了红花经水提取、柱层析分离、醇沉淀、再经柱层析分离、超滤膜除菌和冷冻干燥步骤，制备得到羟基红花黄色素A干粉。该方法虽然保证了羟基红花黄色素A的纯度，但采用醇沉工艺，导致羟基红花黄色素A流失大，最终制备得到羟基红花黄色素A的收率很低，不到2％，不利于工业化生产，工艺无生产实际应用价值。CN101195647A公开了羟基红花黄色素A的制备方法，药材红花经水煮提取、大孔吸附树脂柱层析分离、葡聚糖凝胶柱层析分离和微孔滤膜过后，喷雾干燥制得羟基红花黄色素A干粉。该方法生产羟基红花黄色素A的纯度和收率，整体上而言，比之前现有技术均大大提高。然而，现有技术从红花中生产羟基红花黄色素A的方法，羟基红花黄色素A的收率还是不够理想，其不利于红花药材的充分利用，以及造成羟基红花黄色素A在生产工艺中被大量流失。

发明内容

本发明目的在于提供一种高纯度、高收率的从红花中提取、分离和纯化羟基红花黄色素A的方法。为实现本发明目的，本发明技术方案如下：

本发明提供了一种制备羟基红花黄色素A的方法，其包括红花药材的提取、大孔树脂分离、葡聚糖凝胶层析分离和超滤的步骤，其特征在于：

所述的提取是红花药材以水为提取溶剂，于40～60℃超声波频率40KHZ进行超声波提取40-60分钟；

所述的大孔树脂分离是用大孔吸附树脂HZ801；

所述的葡聚糖凝胶层析分离是用葡聚糖凝胶LH-20；

所述的超滤是用截留分子量8000-10000道尔顿的超滤膜。

上述所述的方法，其中所述的大孔树脂分离，大孔吸附树脂柱的柱内径与柱高的比值为1∶8～15。

上述所述的方法，其中所述的大孔树脂分离，以纯化水为洗脱剂，洗脱流速10～30ml/min。

上述所述的方法，其中所述的葡聚糖凝胶层析分离，层析柱的径高比为1∶5～10.

上述所述的方法，其中所述的葡聚糖凝胶层析分离，以纯化水为洗脱剂，洗脱流速控制线性流速为1～10cm/h。

作为优选，本发明提供了一种制备羟基红花黄色素A的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)提取：取红花药材，粉碎，加水10～15倍，于40～60℃超声波频率40KHZ进行超声波提取40-60分钟，得到红花水提取物；

(2)大孔吸附树脂分离：步骤(1)得到的红花水提取物用大孔吸附树脂HZ801柱分离，大孔吸附树脂柱的柱内径与柱高的比值为1∶8～15，以纯化水为洗脱剂，洗脱流速10～30ml/min，收集洗脱液，减压浓缩，得红花黄色素浓缩液粗品；

(3)葡聚糖凝胶层析分离：步骤(2)得到的红花黄色素浓缩液粗品过滤或离心后用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶层析分离，层析柱的径高比为1∶5～10，以纯化水为洗脱剂，洗脱流速控制线性流速为1～10cm/h，收集含羟基红花黄色素A洗脱液，减压浓缩得浓缩液；

(4)超滤：步骤(3)所得浓缩液经过滤或离心后采用截留分子量8000-10000道尔顿的超滤膜进行超滤得到超滤液；

(5)冻干：步骤(4)所得超滤液经冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。

本发明通过对红花药材提取羟基红花黄色素A的大量提取工艺研究，令人意外地发现，采用中药材超声波提取技术，在一定的温度和超声波频率下，即于40～60℃超声波频率40KHZ进行超声波提取40-60分钟，能从红花药材中最大限度地提取出羟基红花黄色素A，而且提取时间短，提取出的杂质成分少，不仅提取效率高，而且有利于后续的分离和纯化步骤，大大提高羟基红花黄色素A的收率和得率水平。

表1：超声频率对比表

试验结果表明，本发明超声波频率40KHZ进行超声波提取可以提高提取率。

表2：温度对比表