[发明专利]食品调味品中罂粟成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于植物源成分的检测技术，具体地说是用实时荧光PCR技术检测食品调味品中罂粟成分的检测方法。 

背景技术

罂粟(Papaver somniferumL)是罂粟科的二年生草本植物。原产小亚细亚、印度和伊朗。我国部分地区药物种植场有少量栽培。 

罂粟壳含少量吗啡(Morphine)、可待因(Codeine)、蒂巴因(Thebaine)、那可汀(Narcotine)、罂粟壳碱(Narcotoline)和罂粟碱(Papaverine)；另含多糖约2.4％，水解可得乳糖10％、阿拉伯糖6％、木糖6％、鼠李糖4％、乳糖醛酸(Galacturonic acid)60％、4-0-甲基葡萄糖醛酸(4-0-Methylglucuronic acid)4％、微量岩藻糖(Fucose)、2-0-甲基岩藻糖(2-0-Methylfucose)、2-0-甲基木糖(2-0-Methylxylose)及葡萄糖醛酸(G-tucuronic acid)、景天庚糖(Sedoheptulose)、D-甘露庚酮糖(D-Mannoheptulose)、D-甘油基-D-甘露辛酮糖(D-Glycero-D-Mannooctulose)、内消旋肌醇(Mesoinositol)、赤藓醇(Erythritol)。食品中加入罂粟味道鲜美，但过量食用后易致瘾。 

本发明经过对罂粟和常见食品成分进行PCR检测验证，适合检验检疫对罂粟成分鉴定，引物对罂粟具有满意的特异性和灵敏性，具操作简单，成本低的特点。 

发明内容

本发明属于植物源成分的检测技术，具体地说是用实时荧光PCR技术检测食品调味品中罂粟成分检测方法，为检测罂粟成分提供有效工具，从而加强对食品安全问题的监督监管，保护消费者的合法权益。 

本发明的主要原理为：针对保守序列设计一组引物(上游引物：CODM F：5’-gctaaactcacgcttgcagaaa-3’和下游引物：CODM R：5’-gttacagacgcaccaatattattcaac-3’)。进行核酸检测时，模板DNA经加热至94-95℃一定时间后，DNA双链解离，即变性成单链。当温度下降到退火温度时，两条单链重新配对，即复性。PCR扩增的产物，变性状态下呈单链，荧光染料不与其结合就没有荧光信号。当温度为退火温度时，PCR产物复性成为双链DNA，荧光染料与其结合，可以检测到强的荧光信号。在双链DNA最多时，荧光信号最高，即出现吸收峰，也就是在退火温度下出现最高的吸收峰。 

本发明涉及的食品调味品中罂粟成分的检测方法，其中的试剂包括如下： 

(1)PCR扩增反应液A 

包括1×PCR Master Mix(内含热启动的Taq DNA聚合酶、氯化镁、dNTP)，400nmol/L上下游引物，1.25μL SYBR Green荧光染料； 

上游引物CODM F：5’-gctaaactcacgcttgcagaaa-3’；下游引物CODM R：5’-gttacagacgcaccaatattattcaac-3’ 

其中上游引物、下游引物：1∶1； 

其中dNTP内的四种脱氧核糖核酸的混合物的质量比为dTTP∶dATP∶dGTP∶dCTP＝1∶1∶1∶1。 

(2)阳性对照DNA 

上面所述PCR扩增反应液A，每管24μL的最佳组成为：1×PCR MasterMix(内含热启动的Taq DNA聚合酶、氯化镁、dNTP)，400nmol/L上下游引物，1.25μL SYBR Green荧光染料。 

使用上述试剂盒检测食品调味品中罂粟成分的方法，依次包括下列步骤(1)-(3)： 

(1)待检样品DNA的提取 

DNA提取可使用CTAB法。 

(2)食品调味品中罂粟成分的实时荧光PCR扩增 

A.在装有24μL PCR扩增反应液A的反应管中加入1μL待检样品DNA，混匀。 

B.将PCR反应管放入荧光PCR仪，按下述反应条件完成PCR扩增： 

95℃15min，1个循环预变性； 

95℃15sec，60℃1min，40个循环。 

(3)应用荧光定量PCR仪随机软件，测定熔点曲线。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。 

实施例1 

按下述方法检测从中药店购得的罂粟壳，使用玉米粉作为实验的阴性对照：