[发明专利]星形孢菌素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于化合物合成的技术领域，主要涉及一种利用发酵方法制备星形孢菌素的制备方法。 

背景技术

农药是解决世界粮食问题，保证农作物稳产、高产不可缺少的重要物资，同时也是一个能获得巨大经济利益和社会效益的产业。然而，化学农药残留所引起的环境污染、人畜中毒、病虫抗药性增强等问题日趋严重，大力研究、开发、生产和应用生物农药，已成为全球农业产业发展的新趋势。目前世界各国正在采取实际步骤减少化学农药的使用，如美国环保局曾宣布撤销91种化学农药的登记；欧盟制定了减少一半化学农药使用量的五年和十年计划。我国也将发展生物农药和绿色食品列入《中国21世纪议程》。因此，创制和开发拥有我国自主知识产权、高效、安全的生物农药是实现我国农业可持续发展的迫切需要。 

星形孢菌素由Omura等(1977)首次从S.staurosporeus代谢产物中分离，是一类吲哚生物碱类抗生素。随后，S.actuosus、S.roseoflavus等从链霉菌中分离获得。研究证明，星形孢菌素是一类非特异性蛋白激酶C抑制剂，能够诱导细胞凋亡，具有抗肿瘤活性。目前，国外研究多集中于其生物活性及抗肿瘤、抗癌的机理。尽管Staurosporine是一种典型的三磷酸腺苷竞争性激酶抑制剂，但由于其非特异性而限制了在临床上的应用，目前，已明确了该化合物的生物合成途径，由于其结构合成的复杂性和重要的生理活性而引起了众多有机合成化学家的兴趣，将其作为先导化合物开发潜在的抗癌抗肿瘤潜在药物将成为今后研究的重点。在植物病害防治研究方面，S.roseoflavus strain LS-A24产生的星形孢菌素对多种细菌和植物病原真菌具有较强的抑制作用，且对辣椒疫霉(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病具有良好的防治作用。 

链霉菌是放线菌中产生抗生素种类最多的属，目前，大约发现了550种链霉菌，而且仍然有新的种在不断被发现。在已发现的链霉菌中，只有少数种是植物病原菌，其中，疮痂链霉菌是引起马铃薯疮痂病的主要病原菌之一。目前国内外对马铃薯病原菌的研究主要集中在多样性、致病性、毒素及其遗传多样性等方面，近年来国外已有报道将其作为有益菌株进行开发研究。在国内还未见将链霉菌作为生防菌株进行研究的相关报道，因此，将该菌作为生防菌株进行发酵条件的优化和代谢产物的分离纯化等方面的研究具有重大的意义。 

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种星形孢菌素的制备方法。由疮痂链霉菌许吕亚种产生的星形孢菌素对多种植物病原真菌具有很强的拮抗作用，对TMV也有较强的体外钝化作用，具备作为农用抗生素的开发潜力。 

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案： 

一种星形孢菌素的制备方法，所述的星形孢菌素的分子式为C₂₈H₂₆N₄O₃，结构式为 其是通过发酵疮痂链霉菌许吕亚种CGMCC No.5213制备得到的。 

其中，疮痂链霉菌许吕亚种(Streptomyces scabiei var.xuchangensis)CGMCC No.5213是从河南省许吕市小麦和油菜耕作田土壤中分离筛选获得，并且已于2011年09月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏登记号为CGMCC No.5213。 

其中，发酵所述疮痂链霉菌许吕亚种CGMCC No.5213的最佳培养基的组成为：可溶性淀粉2wt％，黄豆饼粉4wt％，MgSO₄ 0.075wt％、K₂HPO₄ 0.1wt％、FeSO₄·7H₂O 0.001wt％，余量为水。 

其中，发酵所述疮痂链霉菌许吕亚种CGMCC No.5213的最佳发酵条件为：发酵温度28℃，转速200r/min，发酵时间5d。 

其中，发酵所述疮痂链霉菌许吕亚种CGMCC No.5213的最佳发酵条件为：初始pH 7.0，发酵温度28℃，种子液种龄48h，接种量6wt％，转速200r/min，发酵时间5d。 

其中，所述制备方法，还包括分离纯化步骤，并且其分离纯化步骤：发酵液经无水乙醇预处理后，采用乙酸乙酯萃取，萃取液通过硅胶柱层析和硅胶薄层层析，层析液再经高效液相。