[发明专利]一株肠杆菌FY-07及其静态液体深层发酵生产细菌纤维素的方法

权利要求书

1.一种肠杆菌（Enterobacter sp.）FY-07菌株，保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，分类命名为肠杆菌Enterobacter sp.，保藏号为CGMCC No.6103。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于：

所述的肠杆菌FY-07菌落特征：在LB琼脂（蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 5g/L，琼脂粉20g/L）平板上30°C培养24h即可长出白色、圆形菌落，菌落呈颗粒状，边缘规则，大小直径1～2mm，与培养基接触不紧密；

肠杆菌FY-07菌株的形态特征：革兰氏染色阴性，菌体呈短杆状，大小0.5～1.0μm×1.0~2.5μm，不形成芽孢；

肠杆菌FY-07菌株生理生化特征：生长温度15~40℃，生长pH范围5~12，NaCl耐受性0~5％；接触酶，柠檬酸盐利用，吲哚产生，硝酸盐还原实验均为阳性；V.P.，淀粉水解，甲基红，亚硝酸盐还原实验为阴性；葡萄糖发酵为氧化型；对氧的需求为兼性厌氧型。

3.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于所述的肠杆菌FY-07的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。

4.一种使用权利要求1所述菌株生产细菌纤维素的方法，其特征在于该方法在以1~3g/L的NH₄NO₃，0.5~1.5g/L的KH₂PO₄，0.3~0.7g/L的K₂HPO₄·3H₂O，0.2~0.5g/L的MgSO₄·7H₂O，0.1~0.3g/L的MnCl₂和10~50g/L葡萄糖组成的发酵培养基中进行静态液体深层发酵，并采用预处理、碱处理、水洗和干燥，从发酵终产物中提取制得细菌纤维素，具体工艺步骤是：

第一、以无菌水将原始菌种从一个或多个斜面上洗下，直接接入含有万分之一纤维素酶的LB培养基中，好氧发酵培养制成一级种子液；所述的LB培养基的组成包括：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 5g/L，以蒸馏水配制；

第二、将上步培养的一级种子液以5%的接种量接入二级种子培养基中进行好氧发酵培养，制成二级种子液；其中二级种子培养基的组成包括：1~3g/L的NH₄NO₃，0.5～1.5g/L的KH₂PO₄，0.3~0.7g/L的K₂HPO₄·3H₂O，0.2~0.5g/L的MgSO₄·7H₂O，0.1~0.3g/L的MnCl₂和5~20g/L的葡萄糖，以蒸馏水配制；

第三、将第二步制成的二级种子液以10%的接种量接入发酵培养基中进行静态液体深层发酵生产细菌纤维素；其中发酵培养基的组成包括：1~3g/L的NH₄NO₃，0.5～1.5g/L的KH₂PO₄，0.3~0.7g/L的K₂HPO₄·3H₂O，0.2~0.5g/L的MgSO₄·7H₂O，0.1~0.3g/L的MnCl₂和10~50g/L的葡萄糖，以蒸馏水配制；

第四、将第三步中获得的发酵产物，依次经过预处理、碱处理、水洗和干燥的后提取处理工艺得到细菌纤维素。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，第四步所述的后提取处理工艺的具体操作过程是：

预处理：用水洗方法去除细菌纤维素水合物中大部分未与纤维素结合的菌体及其碎片等杂质；

碱处理：用0.1mol/L的NaOH溶液于80℃条件下浸泡2h，除去纤维素水合物中的菌体和残留培养基；

水洗：用蒸馏水多次冲洗，直至纤维素水合物的pH值近7.0；

干燥：最后将纤维素水合物风干或真空干燥，即制得细菌纤维素。