[发明专利]高产聚苹果酸的菌株及其应用和方法

权利要求书

1.高产聚苹果酸的出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）FMT1801，保藏号为CCTCC NO: M 2012223。

2.权利要求1所述出芽短梗霉FMT1801在生产聚苹果酸中的应用。

3.利用权利要求1所述出芽短梗霉FMT1801在生产聚苹果酸的方法，其特征在于，具体步骤为：

a．种子活化

将出芽短梗霉FMT1801接种于种子培养基，在温度为23-30℃震荡培养，得活化种子液；所述种子培养基为葡萄糖40-100g/L、NH₄NO₃1-5 g/L、KH₂PO₄ 0.005-0.3g/L、ZnSO₄ 0.005-0.3g/L、MgSO₄ 0.005-0.3g/L、玉米浆0.05-3 g/L和CaCO₃ 10-50 g/L；

b. 发酵

将步骤a所得活化种子液接种于发酵培养基，在温度为23-30℃震荡培养96小时以上，离心收集液体，得发酵液；所述发酵培养基为糖蜜50-200g/L、氮源1-5g/L、KH₂PO₄ 0.005-0.3g/L、ZnSO₄ 0.005-0.3g/L、MgSO₄ 0.005-0.3g/L、玉米浆0.05-3g/L和CaCO₃ 10-50 g/L；

c. 聚苹果酸提取

将步骤b所得发酵液中加入体积分数为95%的乙醇溶液，4℃冷冻，离心收集沉淀，得到聚苹果酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤a中，所述出芽短梗霉FMT1801按出芽短梗霉FMT1801种子液与种子培养基的体积比为1:100-1000接种，在转速为180-300 rpm培养36-96小时。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述种子培养基为葡萄糖60-80g/L、NH₄NO₃ 2-4g/L、KH₂PO₄ 0.05-0.2g/L、ZnSO₄ 0.05-0.2g/L、MgSO₄ 0.05-0.2g/L、玉米浆1-2g/L和CaCO₃ 20-40 g/L。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤b中，所述活化种子液按活化种子液与发酵培养基的体积比为1:10-20接种，在转速为180-1000 rpm条件下培养96-200小时。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基为糖蜜100-150g/L、氮源2-4g/L、KH₂PO₄ 0.05-0.2g/L、ZnSO₄ 0.05-0.2g/L、MgSO₄ 0.05-0.2g/L、玉米浆0. 5-2g/L和CaCO₃ 20-40 g/L。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤c是加入相当于发酵液体积1-5倍的体积分数为95%的乙醇溶液，4℃冷冻12-36小时，在转速不低于3000rpm的条件下离心不少于5分钟。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述步骤c是加入相当于发酵液体积2倍的质量分数95%的乙醇溶液，4℃冷冻24小时；在转速为3500rpm的条件下离心45分钟。

10.根据权利要求3-9任一项所述的方法，其特征在于：所述氮源为硫酸铵、氯化铵、硝酸钾或硝酸钠。